• Forum - Blanc, Bactéries, Plasmide

Biologie moleculaire

Pourquoi on réalise le test blanc/bleu avec des bactéries contenant le plasmide pCR2.1-.  [...]

[Génétique] vecteur de plasmide

dans les vecteur de plasmide en peut cloner un ADN étrange par insertion dans un gène de résistance à un antibiotique la question est quelle est la méthode pour identifier les bactéries qui ont incorporés les plasmides recombinés ou le plasmides intacte.  [...] Dans ce cas pour différencier ces bactéries de celles qui ont le plasmide recombinant avec ton insert, on fait ce que l'on appelle le test blanc-bleu. Dans ton plasmide tu as un gène de résistance, un gène lacz avec son promoteur et d'autre partie encore.  [...]

Extraction du plasmide

la solution de lyse (comme son nom l'indique) va détruire les bactéries afin que les plasmides se retrouvent dans ta solution et non pas inaccessibles, protégées dans les bactéries.  [...] la solution de neutralisation neutralise l'effet de la solution de lyse une fois que tes bactéries sont lysées car a long terme ça peut être néfaste pour ton plasmide, et il me semble (mais je ne suis plus sur) que dans ce kit la neutralisation entraîne aussi la coagulation des débris bactériens qui apparaissent sous forme de nuage blanc dans ton tube afin de pouvoir mieux les éliminer par centrifugation.  [...]

[Génétique] Analyse plasmides recombinants/non recombinants

coli. Ensuite il a fait une sélection blanc/bleu pour distinguer les bactéries contenant les plasmides recombinants des non recombinants. Ensuite, on nous a donné à nous, les étudiants, deux souches A et B. On nous a demandé de lyse les bactéries, puis après plusieurs étapes de purification on a obtenu les plasmides seuls.  [...] Le probleme c'est que pour le puits 6 je ne sais pas quoi déduire... Pourquoi y a t il 2 bandes La bande a 3000 correspondrait à un excès de plasmides non recombinants et la bande a 6000 mon plasmide contenant l'insert Le soucis c'est que quand j'ai lysé les bactéries, je n'en n'ai vu aucune de bleue dans le culot contrairement à l'échantillon A.  [...]

E.coli dans milieu riche + nacl

Dans un milieu riche constitué d'extraits de levure (yeast extract), les bactéries trouvent de telles molécules protectrices. Elles peuvent donc faire face assez vite. Personnnellement, j'ai eu occasion de travailler dessus mais à partir de milieux mineraux minimums, qui sont par conséquent dépourvus de tels osmorégulateurs.  [...] Heu non moi je te parle du blanc de mesure de DO qui doit se faire avec le milieu dans lequel tu mets tes bactos (donc avec NaCl) pour tes mesures, mais sans bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR : migration après amplification (sans digestion enzymatique)

Je dispose de deux colonies bactériennes une blanche et une bleue (ayant donc subi un criblage blanc-bleu) donc une ayant intégré l'insert au niveau du polylinker et l'autre non. Le plasmide originel faisait 3900 pb et l'insert 240. J'en déduis donc qu'une colonie blanche a un ADN de taille 3900+240 soit 4140 pb et une bleue de 3900 pb.  [...] Là je ne suis pas sure de moi du tout. est-ce que pour la colonie bleue il n'y a pas de produit d'amplification et pour la colo blanche il y en a un de 240 pb Je trouve ça illogique car la PCR amplifie l'ADN, or la colonie bleue même sans insert contient bien un plasmide donc de l'ADN.  [...]

Principe alpha complemetation PGEMT

Si le vecteur n'est pas circulaire il ne peut pas se repliquer il ne donnera donc aucune colonie. Tes colonies ont donc forcément un plasmide circulaire, soit il est blanc (pour les diverse raisons invoquées), soit il est bleu car par expl il n'est coupé a 100% (ce qui est peu probable dans le cas d'un plasmide acheté, mais frequent quand on le prepare soit meme).  [...] Bonsoir g une question. quel est le principe de alpha-complementation utiliser par les plasmides PUC et qui permet la sélection des clones recombinants grace a la lac-z Svp c urgent.  [...]

[Biologie Moléculaire] Passer d'une miniprep à une maxiprep

Est ce que je prend l'Eppendorf qui contient ma miniprep (soit le plasmide purifié) et ca je l'étale sur boite (en zig zag) Mais ya pas de bactérie la.  [...] J'ai purifié un produit de pcr que j'ai essayer d'intégrer par éléctroporation dans des bactéries... J'ai laisser les bactéries pousser toute une nuit sur boite de pétri et j'ai ensuite piqué 22 colonies positive (sélection blanc-bleu) pour vérifié qu'elle contenait l'insert ou non.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination transformation

Est-ce qu'il est pas possible que tes bactéries l'aient bien intégré dans leur génome par recombinaison Si c'est le cas, elles n'ont plus besoin du plasmide donc elles l'ont peut-être détruit, et donc tu ne peux plus le détecter (si c'est le cas tu devrais essayer de le chercher directement dans le génome de la bactérie).  [...] non pas du tout...je ne veux pas intégrer le gène de résistance. En fait j'ai des bactéries résistantes à l'ampi qui poussent sur mes boites ainsi qu'en culture liquide et qui n'ont rien à voir avec mes plasmides ou d'autres plasmides manipulés au labo.  [...]

[Biologie Moléculaire] Manque de fiabilité crible Blanc-Bleu

Pour différencier les bactéries recombinantes avec / sans insert on a fait un crible blanc-bleu.  [...] Enfin il y a aussi des faux négatifs, c'est à dire des clones bleus qui peuvent contenir l'insert car cet insert n'empeche pas la synthèse de la b-gal.   [...]