• Forum - Biologie moléculaire, Migration, Protéine, Page

[Biologie Moléculaire] migration protéine sds page

J'ai réalisé une électrophorèse sds page mais j'ai laissé migré trop longtemps les protéines, cela a-t il une influence au niveau des bandes lors de la révélation.  [...] Pour compléter, si tu laisses migrer trop longtemps, les protéines les plus petites (celles du marqueur comprises) vont sortir de ton gel. Et tu ne les verras donc pas lors de la révélation vu qu'elles ne seront plus là, mais en train de nager dans ton tampon de migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] Migration SDS page en "sourire"

Je rencontre récemment un problème avec mes migrations SDS page. la migration ne se fait pas de manière droite, mais remonte de chacun des deux cotés, formant un front de migration en sourire, très génant s'il y a des échantillons placés aux extrémités.  [...] Cela cause une migration plus lente des échantillons des puits périphériques caractérisé par des bandes protéiques ayant migré plus rapidement au centre du gel, créant un patron ayant la forme d'un sourire... Pour assurer un refroidissement uniforme de tout le gel, diminuer le voltage et augmenter la durée de migration.  [...]

Electrophorèse bidimensionnelle VS unidimensionnelle

L'électrophorèse bidimensionnelle (2D-E) consiste en une séparation des protéines en deux temps. l'isoélectrofocalisation (IEF) sépare les protéines selon leur point isoélectrique (pI) puis une migration en conditions dénaturantes sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE), perpendiculairement à l'IEF, sépare les protéines selon leur masse moléculaire (MW).  [...] Après coloration des protéines séparées, on obtient un gel pouvant contenir plusieurs centaines voire plus d'un millier de spots protéiques. L'ensemble de ces spots représente le profil protéique de l'échantillon étudié (cellules, tissu, etc...). La comparaison de profils protéiques correspondant à des états particuliers, par exemple sain et malade, permet de déceler les protéines liées à ces états.  [...]

QCM - Immunoprécipitation

A-Après migration en gel non dénaturant, on identifie la protéine B dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A au poids moléculaire de 2kDa.  [...] En fait, pour moi D est faux car la migration en SDS-PAGE est dénaturante et qu'on aura donc plus de complexes multimoléculaires.  [...]

[Biochimie] technique PAGE non dénaturante

Bonsoir tout le monde, j'aimerais bien connaitre le principe de la technique de séparation des proteines PAGE en condition non dénaturante et quel est la différence entre PAGE et SDS page et utilités.  [...] PAGE en conditions dénaturantes. les protéines sont traitées de façon à les délier et à séparer d'éventuelles sous-unités. On détruit donc leur structure tridimensionnelle. La forme de la protéine n'intervenant plus dans la migration, celle-ci se fait uniquement sur la base de la masse de la molécule. L'interprétation est généralement plus simple.  [...]

[Biochimie] électrophorèse

J'ai réalisé une électrophorèse SDS-PAGE, et j'obtiens à l'aide de marqueurs, un courbe dont l'abscisse correspond au distance de migration et l'ordonnée, le Log du Poids Moléculaire.  [...] Le problème est que je n'arrive pas à obtenir un seuil de coupure correspondant a mes pourcentage de gel. ( comparaison avec les valeurs commerciales). Je sais qu'il faut tracer une tangente mais quelle valeur prendre.   [...]

Recepteur à l'insuline en SDS PAGE

Ce n'est pas le tampon de migration qui contient du beta-mercapto, c'est le tempon dans lequel est repris les protéines laemli. Cette etape, denature totalement la proteine (pont S-S compris). Ensuite la presence de SDS permet de faire migrer les protéine uniquement en fonction de leur poid moleculaire apparent.  [...] Et donc, selon la distance de migration pour un type de gel donné sera associé à un rayon de Stock théorique...proportionnel à la taille de la protéine complexée par les molécules de SDS, et donc, proportionnel au poids moléculaire.  [...]

[Biochimie] Problème avec mon western

J'ai un souci avec mon western blot sur SDS-Page, la migration et le transfert se sont bien déroulés, la première révélation de ma protéine d'intérêt s'était nickel.  [...] ...Dans le cas où les deux protéines ont des poids moléculaires suffisamment espacés, on peut couper la membrane entre les deux tailles attendues (grâce au marqueur de taille) et faire l'incubation de chacune des parties avec l'anticorps adéquat. Ou alors, si les deux protéines ont des tailles proches, il y a trop de risque de couper des bandes d'intérêt, donc on peut faire migrer deux gels en parallèle.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vrai ou faux : Daltons et taille moleculaire

On m'a dit. la taille de la molécule n'a pas de rapport direct avec sa masse moléculaire. On peux avoir une molécule volumineuse, mais qui ne pèse pas grand chose, ou une molécule compacte qui est peu volumineuse, mais qui est lourde.  [...] Dans un SDS PAGE tu dénature la protéine qui devient dès lors linéaire. Mais tu ajoutes aussi du SDS qui est un détergent ionique qui va charger négativement l'ensemble de tes protéines. Du coup, la charge globale intrisèque de la protéine n'entre plus en jeu dans la migration, seule la taille compte.  [...]

[Immunologie] immunoblot...

Pour lire un poids moleculaire d'une proteine inconnue sur un gel, je dessine une courbe de calibration avec mes poids moleculaires standards. et apres Y a t-il un rapport logarythmique dans la migration des molecules.  [...] Je crois que l'objet de la question de Clac2000 est comment, à partir du standard, on détermine pus précisément le PM de la protéine. Si tu la connais, effectivement c'est juste une vérif et une lecture approximative sur le gel suffit. Si tu ne la connais pas, tu peux faire une courbe ou tu mets le Rf (distance parcourue/distance totale) en fonction du poids moléculaire connu de tes standards.  [...]