• Forum - Bandes, Protéines, ADN

[Génétique] Retard sur gel

Ce que je me demande, c'est si ces 3 bandes correspondent à 3 protéines différente sur le brin d'adn, du genre.  [...] 3 bandes c'est un ADN nu + 2 complexes ADN-proteines (le poid de la proteine est different).  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN et contaminants

donc à priori ces grosses bandes près des puits seraient de l'ADN Sinon j'ai un doute mais lorsque l'on mesure la DO à 260, on détecte ADN et ARN en même temps donc même en ayant un bon rapport (près de 1.8) ça ne signifie pas qu'il n'y pas de contaminant ADN Ce rapport permet de dire juste s'il y a ou non des protéines. C'est bien ça merci.  [...] Oui c'est ca. Le rapport 260/280 te permet de voir si tu as des contaminants (protéine, phénol), et si ton culot est bien redisssous.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Personnellement ce genre de bandes me fait plus penser à des problèmes de concentration ou alors a des impuretés dans le gel. Tu as essayé avec une autre poudre d'agarose pour voir si ça faisait pareil.  [...] Il m'est arrivé d'avoir des bandes moches comme ça lorsque je m'étais planté de bleu de dépôt, j'avais utilisé du bleu de dépot de protéines (avec bétamercapto) pour migrer de l'ADN.  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

Exemple d'applications ben comme dans le sujet que j'ai mis en lien ^^ (pour détecter des protéines ubiquitines, c'est à dire des protéines qui marquent les protéines à éliminer, éliminés par les protéasomes situés dans les noyaux et cytosoles des cellules d'ailleurs).  [...] Donc si j'ai bien compris, les protéines en B sont plus ubiquitinés que les protéines en A par exemple, car les tâches sopnt certes un peu moins intenses (qualité vraiment pourri) mais nous avons plus de bandes, donc l'invalidation de USP1 se fait plus ressentir en B qu'en A.  [...]

Electrophorèse acétate de cellulose

En l'occurrence justement, quel serait le sens de migration des protéines à un pH de 8 (pH du TAE), sont-elles chargées positivement ou négativement (je suppose que cela peut varier en fonction des protéines).  [...] Du coup, la migration se ferait à la fois selon la taille et la charge des protéines Ou, si l'on considère que leur charge est la même, uniquement en fonction de leur taille.  [...]

Sequence 5' pour un ADNc en Southern Blot

Lors de l'etude de la plus frequente maladie hereditaire, l'hemochromatose, on remarque que la pathologie est du au gene HFE. On effectue alors un southern Blot sur l'ADNc et l'ADN genomique, expression du gene. Ils sont digeres par l'enzyme de restriction Hind III. Voila les resultats que l'on obtient.  [...] En ce qui concerne tes problèmes pour l'extrémité 5' cela me parraît un peu moins clair, mais sur ton ARN il existe une partie 5' UTR (untranslating region) qui sort de la region codante mais qui est quand même transcrite.   [...]

[Biochimie] Paramètres western blot

Je migre generalement jusqu'a ce que mon bleu sorte du gel (~ 1h) et mes bandes a haut PM sont super bien separee. Je sais que la meme compagnie vend aussi des gels specifiques pour les grosses proteines.  [...] Mais si tu n'as que ces deux protéines à regarder, n'hésites pas à faire sortir des bandes de l'ordre de 100 kDa, tes deux formes seront d'autant mieux séparées.  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Le front de migration n'est pas net (plus une sorte de flou bleu qu'une bande), et les protéines ne se séparent pas bien. En Coomassie le bas du gel ne présent pas de belles bandes discrètes. Pourtant le marqueur lui migre très bien.  [...] Et si on regarde bien la photo du gel on voit une sorte de front (trait bleu) avant la fin du gel, là ou s'arrête les protéines sous forme de bandes discrètes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western Blot avec membrane PVDF

Cependant après révélation, je retrouve sur toutes mes membranes le même genre de motifs, des bandes très épaisses entre 60 et 80 kDa par exemple. A cause de ça je n'arrive pas a détecter la présence de mes protéines d'intérêt, les bandes étant noyées dans les plus épaisses.  [...] J'ai déjà entendu dire que la membrane de PVDF pouvait mieux retenir certaines proteines, est- ce le cas Avez-vous déjà rencontré ce problème et si oui, comment peut-on éviter au mieux d'avoir un signal aspécifique.  [...]

[Biologie Moléculaire] PFGE : électrophorèse en champ pulsé : Plugs

en fait les plugs sont les échantillons préparés, pris en masse dans de la gélose et moulés avant d'être soumis à l'éléctrophorèse par champ pulsé. C'est un terme employé dans les protocoles de PFGE.   [...] je veux demandé une autre chose,restons dans PFGE, quant la photo sera prise et les bandes sont bien claires comment je peux interpretè les bandes.. (c pour mon memoire au fait),comment je décrit la migration des defferents fragments d'ADN des defferents souches.  [...]