• Forum - Bandes, ADN, Bactérie

[Microbiologie] analyse profil hybridation

svp comment je fais une analyse de profil PCR des bandes d'ADN chez une bacterie.au fait j'ai 4 echantillons +.  [...]

interpretation electrophorese d'un plasmide purifié

moi je vois qu'on a deux bandes une légère qui correspond a l'ADN génomique de la bactérie et la bande épaisse en dessous c'est notre plasmide circulaire purifié.  [...] Oui c'est possible ça veux dire qu'une étape de la purification a été laissé posé trop longtemps. Je ne sais pas si vous avez utilisé un kit pour faire ça mais il y a une étape où effectivement le temps d'incubation est assez critique pour ne pas avoir de contamination d'ADN de haut poids moléculaire.  [...]

RT-PCR et PAGE en conditions dénaturantes???

C'est sutout vrai pour la migration d'ADN circulaire, type ADN bactérien, mitochondrial ou encore plasmide. On obtient souvent 2 bandes correspondants à une forme enroulées qui va se faufiller dans le gel, et une bande de plus haut PM apparent. Je ne me rapelle pas avoir utiliser de l'urée pour un northern ou un southern blot.  [...] on travaille en conditions dénaturantes pour éviter que les structures secondaires (ADn ou prot)n'interfèrent dans la migration ou qu'on ait deux bandes au lieu d'une.  [...]

[Génétique] Retard sur gel

mais l'on voie 2 bandes car. la plus petite bande il n'y a qu'un site fixé par la protéine, la plus grande bande car il ya les 2 protéines fixés.  [...] Donc en gros si tu as un systeme purifie ADN + proteine pure, tu as une bande si aucune fixation (ou fixation hyper forte et tout l'ADN est retarde), une ou deux bandes si tu as au moins un site de fixation de ta proteine. Attention, tu peux avoir plusieurs sites de fixations et seulement 2 bandes voire une seule (par exemple si l'affinite est si grande que tu ne peux voir les etats intermediaires).  [...]

Sequence 5' pour un ADNc en Southern Blot

Lors de l'etude de la plus frequente maladie hereditaire, l'hemochromatose, on remarque que la pathologie est du au gene HFE. On effectue alors un southern Blot sur l'ADNc et l'ADN genomique, expression du gene. Ils sont digeres par l'enzyme de restriction Hind III. Voila les resultats que l'on obtient.  [...] Voici ma question. Compte tenu du fait que l'ADNc ne contient que des exons comment se fait il que la sonde extremité 5' detecte quelque chose car il me semble que dans L'ARN mature ( qui permet d'obtenir l'adn c par RTPCR ), la sequence 5' n'est pas transcrite.  [...]

[Biologie Moléculaire] gel ADN stress

ces ADN sont extraient de feuilles auxquelles j'ai appliqué un stress à différents niveaux. j'ai obtenu des bandes au même niveau. c à d de même taille. mais la quantité diffère.  [...] Pour ce qui est du sujet, lola10395, n'as-tu pas la possibilité de quantifier ton ADN à l'aide d'un spectrophotomètre UV (genre Nanoview ) Ce sera plus précis et tu t'épargneras sûrement les questions de sensibilité du BET, de gel qui peut refroidir trop vite et donner des bandes pas très jolies (je parle d'expérience...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Bandes d'ADN non amplifié??

J'ai effectué une PCR certaines amorces ont été révélées incompatibles chez certaines souches, cependant seul quelques souches montrent après analyse sur gel des amplifiats des bandes correspondant à l'ADN (vérifié par la taille correspondant à celle de l'ADN mis au départ), ma question est pourquoi cette bandes n'apparait pas chez les autres souches.  [...] Merci d'abord pour ta réponse, c'est vrai que l'amorce est incompatible, c'est une possibilité, c'était une RAPD, il s'agit d'ADN total extrait, et le problème c que d'autres souches sont négatives sans monter cette bande d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux bandes en PCR

Tous les groupes ont les deux bandes sauf un Vous travaillez tous avec le même plasmide ou vous avez fait chacun une prep à partir d'une colonie bactérienne.  [...] Effectivement j'ai négligé l'ADN génomique. Donc non c'est pas la quantité de plasmide. Cependant je maintiens que ça n'est pas deux bandes mais un dédoublement d'une seule bande du fait de la masse d'ADN que vous avez produit. Ca arrive, c'est rien.  [...]

[Biologie Moléculaire] PFGE : électrophorèse en champ pulsé : Plugs

en fait les plugs sont les échantillons préparés, pris en masse dans de la gélose et moulés avant d'être soumis à l'éléctrophorèse par champ pulsé. C'est un terme employé dans les protocoles de PFGE.   [...] je veux demandé une autre chose,restons dans PFGE, quant la photo sera prise et les bandes sont bien claires comment je peux interpretè les bandes.. (c pour mon memoire au fait),comment je décrit la migration des defferents fragments d'ADN des defferents souches.  [...]

[Biologie Moléculaire] contrôle positif PCR

je suis assistante ingénieur dans un laboratoire d recherche. j'ai un petit problème avec les contrôles positifs pour mes PCR. juste après quelque semaine, (si j'ai de la chance) la bande est très faible, mais il m'arrive de la perdre complètement.  [...] c'est de l'adn, genotypage à partir de bout de queue de souris. programme classique d'une PCr, on veut juste reconnaitre les animaux hétérozygotes (deux bandes) des wt (1 bande). C'est assez simple, mon contrôle positif doit avoir deux bande, mais souvent ça marche une seule fois et la semaine d'après les bandes ont disparu.  [...]