• Forum - Bande, Fragments, ADN

[Biochimie] etude de proteine de liaison à l'ADN

j'ai fait un TP ou on a purifié un domaine de liaison a l'ADN et je suis sur que pour l'examen qu'en passe dans 2 jours ils vont nous demandé les techniques permettant d'étudier cette liaison.  [...] En gros, ta sonde libre va migrer en bas du gel, et en présence d'une interaction avec une protéine, le complexe ADN-protéine sera ralenti dans le gel puisque plus gros. il apparaitra une bande radioactive dite retardée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Le 1er gel est tout à fait normal, tes ladders sont propres, pour les bandes incurvées c'est pas super flagrant et surement lié à la quantité d'ADN.  [...] Echantillon surchargé. on ne peut pas y faire grand chose quand on fait un gel préparatif, à part prendre un peigne avec des dents plus larges ou répartir l'ADN dans plusieurs puits. Ca a l'inconvénient d'augmenter la taille du morceau d'agarose qu'on découpe.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Lors que nous avons fait sa sur nos nouveaux patients, nous n'avions rien en PCR1 et 2, juste une bande en dessous de 100pb (surement les amorces...) au lieu de la bande attendue à 1700pb.  [...] Même si ca ne résoud pas la compréhension de votre problème actuel, pourquoi ne pas chercher à amplifier un fragment plus petit, 300bp suffisent largement pour discréminer entre une amplification spécifique, et les dimers de primers.  [...]

une seul bande d'ARN visible voir deux...

voilà suite a vos réponses j'ai pu continuer ma manip'. Mes échantillons se déposent bien au fond de mon gel mais lorsque je le visualise sous UV, je n'apercoit qu'une bande et non au moins 2 + un smire.  [...] Avec difficultés j'ai pu voir une deusieme bande mais très faible. Cela pourrait il venir de la concentration trop élevé de mon échantillon de départ (avant extraction de l'ARN).  [...]

[Biologie Moléculaire] structure des protéines

Je me souviendrai toujours de l'exo qu'on nous a fait pour nous l'apprendre lors d'un TP. On était quand même 6 binômes, il y avait 6 gels avec 17 pistes/gel et chacun devait interpréter une piste. Et quand tu penses qu'il n'y avait pas deux gels avec les mêmes résultats, tellement la purif avait merdé, tu peux imaginer que ceux qui commençaient par interpréter se faisaient déglinguer par tout le monde parce que personne ne pigeait de quoi on parlait.   [...] Comme le pic radioactif ne se situe as sur la bande de proinsuline ou d'insuline, cela signifie que les polypeptides synthétisés ne sont ni de la proinsuline, ni de l'insuline. Ci c'est faux alors je n'ai rien compris.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb migration ADNg sur gel

Par contre, merci pour l'hypothèse de la dilution du marquage en augmentant la quantité d'ADN, je n'y avais pas pensé une seule seconde. Je vais voir en déposant moins d'ADN.  [...] Sur le premier gel j'ai effectivement un genre de patate en haut du gel. La première bande en haut pour la piste du marqueur correspond à un fragment de 10kb. Mais l'intensité est très légère sur le gel. Le BET s'incorpore bien pour le marqueur, je ne pense donc pas que le problème vienne du BET.  [...]

[Génétique] Analyse plasmides recombinants/non recombinants

En fait, j'ai une bande à 3000 pb, et une bande à 6000… sachant que mon plasmide fais 3000 pb est ce que ça veut dire que mon insert fait 3000 pb et qu'il y a des plasmides non recombinants (bande à 3000 pb) ou y a t-il encore une histoire de relâchement Je me suis aussi demandé s'il était possible qu'il y ait des inserts en large excès et que les plasmides soient tous recombinants.  [...] Le probleme c'est que pour le puits 6 je ne sais pas quoi déduire... Pourquoi y a t il 2 bandes La bande a 3000 correspondrait à un excès de plasmides non recombinants et la bande a 6000 mon plasmide contenant l'insert Le soucis c'est que quand j'ai lysé les bactéries, je n'en n'ai vu aucune de bleue dans le culot contrairement à l'échantillon A.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème révélation WB

Pour la seconde révélation, augmentes-tu le temps d'exposition (l'activité HRP décroit au cours du temps...) La bande qui disparait, comment se situe-t-elle par rapport aux deux autres bandes (beaucoup moins intense, plus intense, équivalente,...).  [...] Sans avoir les images sous les yeux, les interprétations que nous pouvons faire de ton problème sont approximatives. Selon les niveaux d'intensité, les comportements des bandes peuvent pas mal différer, je ne peux pas aller plus loin dans les suppositions.  [...]

[Biochimie] Test de grossesse

l'urine migre sur la bandelette contenant anticorps HCG* qui détecte la sous unité bêta de l'hormone HCG( seulement si la femme est enceinte) et des anticorps placé plus loin qui détecte la sous unité alpha d'HCG(pour contrôler si le test a fonctionner. Cette partie de la bandelette ce colore même si la femme n'est pas enceinte.).  [...] Probablement que la bande contrôle détecte une molécule qui est toujours présente dans les urines de la femme, qu'elle soit enceinte ou pas. Cela permet de vérifier si les conditions pour que ce type de test marche sont réunies. Dans le cas où le contrôle positif ne s'allume pas, on peut considérer le résultat du test non valide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Causes d'échecs de la production de protéines recombinantes

faire des prélèvement à différents temps de l'induction pour voir quelle bande devient de plus en plus intense sur le gel.  [...] ) car au bout d'un certain temps on n'observe plus d'augmentation de la production. Et au bout d'un long moment on observe même une diminution de l'intensité de la bande car la protéine est dégradée. Il faut donc trouver l'équilibre pour avoir une bonne production sans qu'il y ait protéolyse.  [...]