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[Biochimie] Induction d'une protéine

L'IPTG est donc une molécule qui va stimuler un opéron ( ici l'opéron lactose) et qui va donc augmenter l'activité transcriptionnelle de la bactérie, d'où une augmentation de la synthèse de ma protéine.  [...] Et enfin si j'ai bien compris, c'est normal que mes DO avec IPTG ne soient pas superieur aux DO sans IPTG, car la quantité de bactérie dans ma solution n'est pas liée à la surproduction de protéine engendrée par l'IPTG, dans ce cas je ne vois pas l'intérêt de faire une étude comparative.  [...]

[Biochimie] Expression protéique

Ensuite, vérifie si ta protéine est adaptée à l'expression hétérologue en bactérie. Si ta protéine entre dans au moins une des catégories suivantes, ça peut etre compliqué.  [...] Dans les deux derniers cas, la situation peut etre rattrapable en bactérie. Si ce qui t'intéresse, c'est de produire la protéine pour l'utiliser ensuite dans diverses manipes, passe en E. Coli et privilégie la souche Rosetta qui est particulièrement adaptée à ce genre de cas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

petit détail, la sélection des bactéries par l'ampicilline sert à savoir si la bactérie possède le plasmide, mais cela ne donne pas d'indication si le gène codant la protéine a bien été inséré dans ce vecteur.  [...] Ensuite il faut insérer tout les plasmides dans une bactérie lambda, effectuer une transformation bactérienne pour rendre la protéine native inefficace. Puis la bactérie portant le bon plasmide est sélectionnée parmi toutes les autres sur un milieu nécessitant la protéine d'intérêt (or le gène natif ayant été muté, la protéine ne pourra provenir que du plasmide).  [...]

[Evolution] est ce que l'évolution est "égo-stricte"?

en quelques sorte oui, ma question d'une autre manière est quelle est l'utilité de l'antigène bactérien, si ce n'est présenter sous forme codée par des protéine les caractéristiques intérieur de la bactérie au macrophage.. je pense que ça ne sert à rien à la bactérie à part ça, la démasquer au système immunitaire des hôtes ou je me trompe peut être.  [...] La protéine antigénique a très probablement une autre utilité pour la bactérie qui n'a rien a voir avec son caractère antigénique, même si il faut se méfier d'interprétation disons finalistes de l'évolution selon lesquelles tout caractère aurait forcément une utilité.  [...]

[Immunologie] Epitope (incompréhension)

J'ai une question à propos de l'antigène, il est dit que l'antigène possède plusieurs déterminants antigéniques (épitope), par exemple une bactérie est un pathogène celui ci possèdes des protéines membranaires donc les protéines membranaires seront les antigènes mais je comprends pas quelques choses c'est au niveau de l'épitope, la glycoprotéine transmembranaire de la bactérie aura par exemple des polysaccarides fixés a elle, ces polysaccarides pourrait être des épitopes Un Acide Aminée qui compose cette glycoprotéine pourrait être un épitope, enfaite je comprends pas tellement ce que pourrait être un épitopde au niveau d'une protéine par exemple, merci pour vos futures explications.  [...] Oui mais il y a un truc que je comprends pas par exemple cette protéine antigénique qui appartient à une bactérie ( en restant dans l'exemple de départ) donc cette protéine du non soi si je prends l'exemple d'un récepteur membranaire de la bactérie comment peut-il posséder plusieurs épitopes C'est assez ambigu quand ont dit qu'un antigène possède plusieurs épitopes c'est à dire que plusieurs parties de la protéine peuvent être reconnu comme du non soi.  [...]

[Biotechnologie] Expression d'une protéine

Il suffit de rajouter les sites de restriction avant l'ATG sur le primer forward, et après le STOP sur le primer reverse, en prenant soin de rajouter quelques nucléotides (j'en met 5 perso) de part et d'autre pour faciliter l'assise des ER.   [...] Mon problème étant surtout que je pensais seulement avoir la séquence à partir de l'AUG, mais j'ai bien l'ensemble du gène. je change seulement quelques bases au début pour créer un site.   [...]

[Génétique] Les introns en génie génétique

mais maintenant je me demande comment les bactéries pourraient elles reproduire cette protéine étant donné que le gène contient peut-être des introns, que la bactérie ne peut enlevés...et donc l'empêcher de créer la protéine.  [...] Eh bien on utilise un cDNA et pas une banque d'ADNg. Le cDNA proviens d'une transcription inverse de l'ARNm (qui a donc été débarassé des introns). Par contre faire exprimer un gène codant une protéine de venin de serpent chez une bactérie, à quasiment aucune chance de donner une protéine active au final.  [...]

Gène Syncytine

On introduit dans une bactérie pas transformation. Production de la protéine. Par contre la faudra utilisé un modèle animal pour voir les conséquences, parce que sur une bactérie ça va pas être top. Donc la on va utiliser la transfère. Donc clonage + mutagène = protéine mutée -. transègne ou directement, injecter l'ADN muté.  [...] Mais je vois plus l'intérêt de cloner un gène non mutée qu'on sait que s'il est mutée peut alors entrainait une surexpression et donc après en aval trop de protéines pouvant être pathogène, donc on pourra identifier selon les mutations qu'on fait les effets tu vois et identifier que c'est CETTE mutation à l'origine de la surpression.  [...]

[Biologie Moléculaire] Système d'expression de prot invitro (cell free)

Je dois produire une protéine grande environ 160 kDa avec un système de production transcription / traduction provenant de mais, homme, lapin et bactérie. Me protéine est une protéine de levure.Voilà ce que je pensais faire.  [...] Ma question est la suivante. Quelqu'un a-t-il déjà utilisé ce genre de kit pour un application similaire (grande protéine - GST - et levure) Si oui lequel avez vous utilisé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

Et ensuite de manière générale pour exprimer une grande quantité de protéine eucaryote on essai de voir si cela fonctionne dans une bactérie (quand ca marche c'est génial car c'est très facile à mettre en place, c'est pas cher et ca fonctionne très bien) malheureusement ca ne fonctionne pas souvent donc on passe dans des système d'expression eucaryote (levures, cellules d'insectes).  [...] Oui, ca parait une solution de riche mais effectivement les prix ont bien baisser et surtout c'est un gain de temps considérable. En plus ca permet de résoudre les problèmes des codons d'usage, en donnant à l'entreprise dans quel type de bactérie on souhaite travailler, elle va syntéthiser le gène avec les codons d'usage de la bactérie.  [...]