• Forum - ARN, échantillon, Concentration

une seul bande d'ARN visible voir deux...

Avec difficultés j'ai pu voir une deusieme bande mais très faible. Cela pourrait il venir de la concentration trop élevé de mon échantillon de départ (avant extraction de l'ARN).  [...] Si tu n'as rien en bas de ton gel il est peu probable que tout se dégrade. Il est possible que tes echantillons soient trop concentrés, essaye de les diluer 10 et 50 fois et redepose sur gel. La derniere fois que j'ai fait ca j'ai vu mes beaux ARNr apparaitre c'etait magique.  [...]

[Biologie Moléculaire] qPCR : Ct tardif

Mon gène de ménage est nickel pour toutes les conditions. Je ne comprends pas pourquoi comme par hasard, les conditions où les ARN étaient les plus faibles, ont des Ct pourris. Je part pourtant de 2ug, la RT est la même.  [...] en fait je te demandais cela par rapport a une dégradation éventuelle. Des fois un échantillon peut etre dégradé mais sans trop affecter la concentration en ARN 18S par exemple.  [...]

[Biologie Moléculaire] EXTRACTION ARNt

Bonsoir, je viens de me lancer dans des expériences d'extraction d'ARNt à partir du sang total.dans ma première extraction j'ai obtenu un randement de 2,1 (DO260=0,069) avec une concentration de 69ug/ml qui me parrait faible. dans l'étape de rétrotranscription selon le protocol je dois prendre 1ug/ul d'ARN alors que mon échantillon a une concentration faible(0,069ug/ul), je ne sais pas quoi faire dans ce cas, est-ce que je peux doubler de volume pour régler ce probleme.  [...] une autre question me préoccupe, la valeur de 69 est la concentration, alors comment déterminer la quantité de mon ARNt.  [...]

[Biologie Moléculaire] contrôle interne en RTqPCR

Pour ces raisons (et quelques autres), on utilise un témoin interne, c'est à dire on amplifie un ARN qui se trouve normalement à concentration constante dans notre échantillon (du moins tout le temps exprimé à un niveau détectable). Ca en fait ainsi un témoin positif à l'intérieur même du puits.  [...] Si il y a amplification du témoin interne, on a bien extrait de l'ARN non lysée de notre échantilon et la PCR n'est pas inhibée, donc un résultat négatif indique bien que l'échantillon ne contient pas ton ARN cible (donc qu'il est bien négatif).  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

Plusieurs fois, en réalisant des triplicate à la même concentration d'ARN de départ, les échantillon d'un patient réellement infecté se sont révélés négatifs. En refaisant la manip en triplicate, mais avec 3 dilutions différentes, le patient à bien été détecté positif.  [...] Donc, on peut se poser la question de savoir si la quantif va se faire aussi bien dans cet echantillon, car le niveau de base est plus fort, donc le début de la phase d'amplification exponentiel sera masquée par ce bruit de fond.  [...]

[Biologie Moléculaire] Q-CPCR encore !

L'idéal est de confirmer que tu as bien pris la même quantité d'ARN en quantifiiant aussi un gène de ménage (qui ne varie pas en fonction du traitement ou de la pathologie), et ce gène de ménage doit être au meme niveau dans tes 2 echantillons. Si ce n'est pas le cas, c'est que tu as.  [...] Donc en fait l'idéal serait que j'ai une idée du nombre de cellules présent dans mon échantillon pour pouvoir ramener ma quantité d'ARN total à un nombre de cellules pour vraiment voir ce phénomène de dilution.  [...]

Extraction ARN/lipides à partir d'un même échantillon

Extraction ARN/lipides à partir d'un même échantillon.  [...] Bonjour, je souhaiterai savoir si quelqu'un connait un protocole permettant d'extraire à partir d'un unique échantillon ARN et lipides en même temps, l'échantillon étant de très faible quantité.  [...]

[Biologie Moléculaire] Urgent: préparer gamme pr qRT-PCR

Je veux faire une qRT-PCR, pour tester mes primers que j'utilise pour la 1ère fois, on m'a dit qu'il faut que je réalise une gamme de mes cDNA. Ma collègue partait d'un échantillon à 2,1 µg d'ARN total, après la RT elle commence par diluer les cDNA au 1/4 puis au 1/10, 1/50, 1/100, 1/150.  [...] Mon échantillon est moins concentré en ARN ~0,6 µg (échantillons rares), donc je me dis que je devrais le diluer au 1/2 puis faire ma gamme, est-ce suffisant j'ai besoin de vos conseils car comme je l'ai dit les échantillons sont rares et je voudrais pas rater cette manip,  [...]

[Biotechnologie] Comment déterminer le rendement d'une RT?

La seule methode pour determiner un rendement de RT est de rajouter un ARN de synthese pur et de quantitee connue. Si tu sais combien tu met de cet ARN au depart, tu va le traiter comme les autres lors de la RT et lors de ta PCR tu va quantifier ton ADNc provenant de cet ARN en meme temps que tes echantillons.  [...] Ce qui est chiant c'est de trouver un ARN dont tu es sur qu'il n'a aucun competiteur dans ton echantillon. Certaines compagnies on speciallement cree ce genre d'ARN qui n'a d'homologue chez aucune espece sequence a ce jour. Forcement, c'est rare donc c'est cher.  [...]

[Biochimie] Gamme étalon BSA

je te conseille de diluer ton échantillon protéique (dans le tp avec lequel tu fais ton 0/blanc) pour que ta Do de l'échantillon rentre dans ta gamme BSA. Après tu trouves la valeur/concentration de ton [B][B] échantillon dilué et tu fais ton calcul pour la concentration finale de ton échantillon en tenant compte de la dilution que tu as effectué.  [...] En connaissant le coefficient directeur de ta droite, tu peux alors déduire théoriquement n'importe quelle concentration à partir de n'importe quelle absorbance. Mais en pratique, il vaut mieux avoir une gamme qui couvre l'ensemble des concentrations que tu as dans tes échantillons.  [...]