• Forum - Anticorps, Western, Résultat

[Journal club] Extinction de l'expression de gènes par les siRNA : la découverte

La figure concernée ne montre que le résultat obtenu avec le siRNA Lamine A/C où on voit une forte diminution du marquage cellulaire par l'anticorps anti-Lamine A/C sans affecter le marquage par l'anticorps anti-NuMa. Ce résultat est confirmé par western blot pour les lamines A et C.  [...] Ca releve plus de la corrélation que de la démonstration et parfois certains articles donnent l'impression de monter des théories générales batties sur un chateau de carte, tellement les preuves sont faibles de l'action du miRNA concerné. Chez C. elegans il y a plusieurs cas bien décrit et ou les résultats sont solides, mais pour le reste a l'exeption de 2 ou 3 miRNA j'ai l'impression que c'est loin d'etre si solide que ca.  [...]

Différence de fixation des cellules

Bien souvent les différences de résultats entre les modes de fixation dépendent de l'anticorps utilisé et de la protéine visualisée. Certains Ab ne donnent aucun résultat en méthanol et s'utilisent exclusivement en PAF alors que pour d'autres c'est l'inverse.  [...] Faut un peu se méfier de tout ce qui est immuno. Le résultat dépend grandement de la conformation de la protéine au moment où vous faites votre manip. En principe, les anticorps sont testés en western blot. Si il n'y a qu'une bande et de la taille attendue, c'est jugé comme bon et l'anticorps est déclaré spécifique.  [...]

[Biologie Cellulaire] Qui à déjà utilisé le système SNAP i.d. de Millipore pour ses Western Blot?

Nous l'avons au laboratoire. Et c'est tout aussi miraculeux que cela en à l'air. En une journée tout est fini. Migration, transfert, bloc, anticorps 1er, anticorps 2e, révélation, etc etc... Le résultat sur la table direct.  [...] C'est seulement lorsqu'un anticorps est déjà un peu limite en western normal que là le SNAPid risque de donner un résultat encore plus moche en terme de spécificité. Mais c'est rare.  [...]

Immunohisto

L'anticorps peut +/- bien marcher en western-blot par rapport a l'immunohisto (ou cyto-)-chimie. Les tampons sont differents, les conditions aussi...l'interaction epitope-site anticorps etant conditionne grandement par des interactions ioniques-electrostatiques, les tampon, pH, ions (...) jouent pas mal.  [...] Comment expliquer que mon anticorps (spécifique de l'état phosphorylé d'une protéine) se fixe sur le tissu cérébral dans une structure Y (donc il marche.), mais pas dans la structure X (y a rien du tout de marquer.) où l'on observe du marquage en western avec le même anticorps.  [...]

résultats WB

j'ai réalisé un Western blot (pièce jointe) et les résultats sont bien ceux auxquels je m'attendais mais je voulais savoir à quoi correspondait les légères petites bandes qu'on peut apercevoir un peu partout est ce un fixation non spécifique de l'anticorps utilisé.  [...] L'anticorps va toujours réagir avec des protéines dont il n'a que peu d'affinité. Si la saturation ou le rinçage n'est pas suffisamment stringent, on garde des bandes non spécifiques (et si le rinçage est trop stringent, on risque de diminuer l'intensité du signal recherché).  [...]

[Biologie Moléculaire] Disparition inexplicable

C'est un peu délicat, car on ne dispose pas d'anticorps contre cette protéine dans la communauté. Aussi on utilise un anti-GFP. Le hic c'est qu'en western je vois ma protéine de fusion au poids attendu (poids de la protéine + poids du GFP), mais chez ces souris la fluorescence sanguine était encore présente, donc il n'y a pas de soucis pour elles.  [...] Cela devient plus problématique quand je fais des western sur les cellules issues d'animaux ayant perdu l'expression de la fluorescence sanguine. Les résultats sont alors difficilement interprétables je me retrouve avec plusieurs bandes en western. Comme si le GFP était dégradé de façon différentielle, l'anticorps ne reconnaissant qu'une plus petite partie.  [...]

Problème RT-PCR sur cDNA

Je suis d'accord avec Piwi, si tu trouves une séquence qui ressemble à un intron dans ton amplifiat, c'est probablement de l'épissage alternatif.   [...] Une autre possibilité. un Western Blot avec un anticorps specifique du peptide que donnerait cet intron s'il était traduit. Si le Western est positif alors tu auras prouvé que cet intron est inclus et tu pourrais même estimer la quantité avec un anticorps contrôle spécifique d'une autre partie de ta protéine.  [...]

informations sur le SIDA

La fin de cette phase que l'on appelle primo infection correspond à la période appelée séroconversion. Traduction. quelques semaines après la contamination, l'organisme produit des anti-corps pour lutter contre le VIH. C'est la présence de ces anticorps que l'on détecte par un test de dépistage qui permet de déclarer que la personne est séropositive.  [...] Le test consiste dans la recherche d'anticorps anti-VIH, par un test Elisa qui sera confirmé par un autre test Western Blot. A partir de la 4ième semaine les résultats de ce test sont fiables à plus de 99%, il est donc inutile d'attendre 3 mois en cas de doute.  [...]

[Biologie Moléculaire] Anticorps GLUT2 pour Western Blot

J'aimerais avoir votre avis sur un petit problème que je rencontre actuellement au laboratoire. Voila je fais des Western Blot depuis un bon moment mais impossible de trouver un anticorps GLUT2 assez potable. En effet beaucoup me donne des bandes non spécifiques.  [...] D'accord Merci a vous, je vais regarder cela en attendant d'autre réponse. J'essaie tant bien que mal de trouver l'anticorps le moins mauvais possible.  [...]

[Biochimie] Etude de la phosphorylation d'une protéine

En fait je pensais aussi faire un western sur ton gel avec des anticorps anti-Ser/Thr/Tyr phorsphorylées et anti- ta-protéine. Je n'ai jamais fait de 2D mais je sais que ça se fait. Et puis pour les grosses protéines ont peut aussi faire des gels d'agarose, au moins pour la première dimension.  [...] Heureusement cette protéine est couplée à l'EGFP, j'ai donc pu mettre au point une immunoprécipitation pour la séparer des autres protéines cellulaire sur SDS-PAGE. En parallèle je réalise un blot avec l'anticorps dirigé contre la protéine virale. Ensuite je découpe sur mon gel coloré au nitrate d'argent la bande immunoprécipitée correspondant à ma protéine.  [...]