• Forum - Anticorps, Protéines, Intérêt

[Biologie Moléculaire] Techniques de transfert

La technique utilise l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide pour séparer les protéines, préalablement dénaturées, selon leur masse. Les protéines sont ensuite transférées depuis le gel sur une membrane (typiquement en nitrocellulose), où elles sont exposées à un anticorps spécifique de la protéine d'intérêt.  [...] Il est possible grâce à cette technique de détecter la présence d'une protéine dans un tissu, d'évaluer sa taille, sa concentration, les variations de cette concentration, effectuer des comparaisons de concentrations entre différents groupes, etc.  [...]

Co-immunoprécipitation: à quoi sert le flowthrough?

Le flow through est censé ne contenir que les autres protéines cellulaires dont je n'ai pas besoin Si la co-pi a fonctionné je ne devrais rien avoir dessus au WB (ou montrerait les restes de protéines d'intérêt n'ayant pas lié) Cela sert à savoir si la liaison entre l'anticorps et la protéine est bonne ou mauvaise.  [...] Ca donne une excellente indication de l'efficacité de la précipitation, en effet.   [...]

[Biologie Cellulaire] Expression des protéines

1. Quand les cellules commencent à exprimer les protéines dans un milieu de culture ( surtout les protéines mitochondriales et celles de la matrice extracellulaire pour les myotubes, lignée C2C12 ) je crois après 48h mais je voudrai confirmer cette infromation.  [...] En fait ce que je pense à faire est. une inhibition exogène par un anticorps dans un premier lieu et une induction exogène par une protéine recombinante pour voir les variations de mes protéines d'intérêt ( mitochondriales + MEC).  [...]

[Biologie Cellulaire] Co-Immunoprécipitation

5. Tu rajoutes un tampon dénaturant (SDS et b-mercaptoethanol), qui va dissocier et dénaturer les anticorps, libérant ainsi les protéines A et B.  [...] Tu peux aussi immunoprécipiter avec un anticorps anti C (autre protéine connu pour ne pas interagir avec A ni B), et vérifier la présence de A ou B. Si tu détectes A ou B, cela signifie que tu as une fixation aspecifique de ta protéine sur les billes, que tes lavages n'étaient pas bons.  [...]

[Biochimie] Différence entre tween, triton x, NP ... ?

Voilà, je voudrai utiliser un detergent non ioniques (le moins dénaturant possible pour mes protéines) pour diminuer les adsorptions non specifiques d'anticorps ou autre protéines d'interet sur un test qui se rappoche de l'ELISA.  [...] Courament pour des manip avec des protéines on utilise du PBS-tween 20 0.05%-0.1% ou du PBS-triton X100 0.1% (note que tu peux remplacer le PBS par du TBS (Tris buffer salin), des fois ca peut aider). En théorie on peut utiliser un blockage au régilait ou à la BSA.  [...]

[Biologie Cellulaire] Notion de contrôles, contrôles isotypiques, culture cellulaire

Notion de contrôles, contrôles isotypiques, culture cellulaire.   [...] C'est bien ça, on utilise un anticorps contrôle de même isotype que l'anticorps ciblant la protéine d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutations et Southern Blot

Question 2. quel est l'intérêt d'utiliser des anticorps dirigés contre la partie N tem de la protéine.  [...] Question 1. Connais-tu la technique Southern Que faut-il pour qu'elle fonctionne que permet t'elle d'identifier Essaie de formuler ce qui te pose problème, c'est comme cela que l'on (= toi et nous) trouve les réponses.   [...]

[Biologie Moléculaire] Cross-reactive protein ?

Pouvez-vous m'indiquer ce à quoi peut correspondre une telle protéine.  [...] Vu la figure, c'est une protéine reconnue par l'anticorps mais qui n'est pas la protéine normalement ciblée par l'anticorps (ici PML). Elle présente un épitope proche de l'épitope reconnu par l'anticorps, elle est donc reconnue par celui-ci. Mais PML sort à quelle taille Car habituellement ce genre de précision n'est marqué que dans le cas où la bande non spécifique peut être confondu avec la bande correspondante à la protéine d'intérêt.  [...]

[Biochimie] western blot

est ce que quelqu'un peut me dire c'est quoi HA dans Pin1-HA sur un western blot.   [...] c'est un tag que l'on peut ajouter aux protéines afin de pouvoir les immunoprécipiter avec un anticorps anti HA (et ainsi voir quelles sont les protéines que l'on co-précipite et susceptible d'intéragir avec la protéine taggée).  [...]

[Immunologie] Recirculation des lymphocytes

D'autres comme S.aureus peuvent coaguler le fibrinogène (protéines sanguines servant à la coagulation) en filaments de fibrine et s'en recouvrir pour se cacher grâce à une coagulase liée.  [...] Elles peuvent aussi utiliser des protéines A capable de neutraliser les anticorps en interagissant avec leur région Fc.  [...]