• Forum - Amplification, Bandes, Mutation

[Génétique] Pcr

à mon avis, les puits vides nous indiquent qu'il n ya pas d'amplification, 1 seul fragment çàd qu'il ya amplification et les deux bandes indiquent la mutation c'est vrai ou non.  [...] En théorie, une bande correspond à un produit amplifié. Donc deux bandes = 2 produits différents (par exemple avec ou sans mutation).  [...]

[Biochimie] Mutagenèse dirigée : pas de mutants

Ensuite, non je ne vérifie pas mes amplicons sur gel, mais ne verrait-on pas l'adn parental quoiqu'il en soit en quoi ça donne une indication du succès de la mutagenèse et comme le mutant et le parent sont censés avoir la même masse je n'y ai pas pensé.   [...] A priori tu ne verras la matrice que si tu en mets beaucoup... par contre s'il y a eut amplification tu verras une bande assez intense. Autre solution tu déposes apres ta digestion à la DpnI comme ca tu es sure de ne voir que la PCR. Si tu la vois c'est que ta mutagénèse a forcément marchée (tes oligos ont tous la mutation).  [...]

problème d'analyse de gel de migration

je cherche a amplifier un cDNA fait a partir d'ARN. les deux amorses sont vraiment spécifique a cet endroit, je les ai blasté avant de l'utiliser. en gros je veu amplifier un cDNA de 700 bp a peu pres donc des oligo a chaque bout pour la pcr et normalement pas de probleme d'hybridation ailleurs que la.   [...] comment jouerai la temperature si c'etait sur l'appariement des deux amorces. dans ce cas on aurai pas d'amplification et donc pas de bandes, et encore moins de bandes multiples.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutation ponctuelle spontanée d'un insert dans un plasmide?

Il est tout à fait probable (et je dirai même que c'est certainement à ce niveau là) que lors de l'amplification de l'insert par la PCR, il y ait eu la mutation.  [...] Il est plus facile de dire qu'une mutation ponctuelle a beaucoup plus de chance de se produire au cours d'une PCR que lors de l'amplification via les bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] Produit PCR / microsatellites

Je suis actuellement en train de travailler sur l'amplification de régions mitochondriales à partir d'ADN dégradé (extraction sur des os) et j'ai un problème en PCR. Quand j'ai testé mes primers en gel d'aggarose après amplification j'obtenais des bandes, certes pas très marquées mais tout de même visibles.  [...] Difficile de savoir pourquoi ton superviseur ne veut pas que tu étudies des microsats. Soit il a essayé sur cette espèce et sait que ça ne marche pas, soit c'est du fait des propriétés générales des microsats. Ces marqueurs évoluent vite et de plus comme les mutations peuvent aussi bien augmenter que diminuer le nombre de répétitions, il y a beaucoup d'homoplasie.  [...]

Utilité de la PCR en médecine ?

On peut aussi poser un diagnostic de mutation comme il a déjà été expliqué plus haut. selon comment tu fais ta manip, l'amplification va témoigner ou non de la présence de la mutation cherchée.  [...] Un peu plus subtil. on peut aussi mettre en évidence une mutation non pas juste sur amplification ou pas, mais sur la longueur de l'ADN amplifié. par exemple, ton produit PCR d'un ADN normal serait de 150 pb alors que celui d'un ADN muté serait de 120 pb, et ça tu peux le voir sur gel d'électrophorèse.  [...]

Real Time -RT-PCR

Je vais devoir faire des qRT-PCR (PCR quantitative) mais j'avoue que je n'y connais pas grand chose.. Quelqu'un pourrait m'expliquer un peu la méthodologie ou les procdures à suivre dans un ordre expérimental, par exemple dans le meme ordre que cette technique doit etre faite Puis qu'elle est la taille minimale-maximale des sequences à amplifier par cette méthode est ce que des sequences de 200-350 pb sont amplifiables par le qRT PCR.   [...] Comme il y a beaucoup de cycles il faut que tu fasses attention à definir des conditions dans lesquelles la spécificité de ton amplification est maximale, faute de quoi des bandes parasites vont perturber ta quantification.  [...]

[Biologie Moléculaire] Questions relatives à la PCR

Merci Josquin pour la réponse concernant les amorces. Pour le problèm, toutefois, toutes les conditions étaient respectées puisque l'expérience à permit d'obtenir des bandes dont la taille était attendue. Toutefois, j'aimerais savoir pourquoi certaines bandes sont moins intenses après amplification.  [...] Merci pour vos réponses. J'avoue ne pas avoir été très clair dans mes propos, mais ma seule question était de savoir ce qui peut expliquer une très faible quantité de produits PCR après amplification. Je crois maintenant connaitre quelques raisons.  [...]

[Génétique] Diagnostic mutation autosomique récessive

Une réaction de PCR permet l'amplification de cette région, que celle-ci soit normale (absence de la mutation deltaF508) ou mutée (présence de la mutation). La distinction entre les trois génotypes possibles (N/N, F508del/N ou F508del/F508del) peut être obtenue par électrophorèse sur gel de polyacrylamide et visualisation des produits de PCR aux U.V.  [...] Quand on dit que le chromosome 7 paternel et maternel portent la mutation deltaF508 cela veut simplement dire que la personne est homozygote =. maladie due à une mutation récessive, les 2 chromosomes doivent porter l'allèle muté.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

On détermine les micro-satellite de l'ADN à l'aide de technique de digestion (comme tu le dis toi même, en coupant l'ADN aux bons endroits), ou de PCR (amplification des centaines de milliers à des millions de fois d'un petit fragment, le microsatellite), puis on fait migrer l'ADN sur gel, révélation (aux UV généralement), et hop, on a nos différentes barres.  [...] Par traitement informatique, la marge d'erreur risque d'être importante. En cause, le chevauchement de bandes. Admettons que l'amplification du micro-satellite 1 (exemple) du tube A donne 3 bandes de tailles différentes (50, 100 et 150). La même amplification pour l'échantillon B donne 40, 100 et 180.  [...]