• Forum - ADN, Vecteur, Expression

[Biotechnologie] vecteur de clonage et vecteur d'expression

donc si j'ai bien compris, le vecteur de clonage s'utilise in vitro alors que le vecteur d'expression est inséré dans une bactérie pour exprimer le gène d'intérêt.  [...] Un vecteur de clonage permet, comme son nom l'indique, de faire un clonage, c'est à dire de placer un insert dans le vecteur d'intérêt (ligation) puis après transfection/conjugaison/infection/... de multiplier la quantité d'ADN au cours des divisions bactériennes/des infections virales/... selon le type de vecteur utilisé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteurs d'expression

Je voudrais savoir quel est l'intérêt de cloner des fragments d'ADN dans une orientation inverse de celle des promoteurs présents ou dans la même orientation Je ne sais pas si c'est très clair.  [...] D'après ce que j'ai compris de ton propos, l'ADN cloné en orientation inverse serait un contrôle négatif, car le vecteur correspondant ne permettrait pas l'expression de la protéine d'intérêt (en faisant que l'hypothèse que ton fragment d'ADN initial contienne une phase ouverte de lecture, un codon stop, etc.  [...]

[Biochimie] Question sur la biotechnologie

Une méthode simple de criblage est l'hybridation sur membrane avec une sonde radioactive. Par exemple, si tu as réalisé ta banque par clonage avec des plasmides chez E. coli, tu fais une réplique des boîtes de Petri contenant la banque sur une membrane de nitrocellulose, tu soumets la membrane à l'action de la soude (qui lyse les bactéries et dénature l'ADN), ensuite tu incube la membrane avec une sonde radioactive complémentaire de ta séquence d'intérêt, puis tu révèles par autoradiographie.  [...] En bio moléculaire, on parle de clones souvent pour parler de gènes. En gros on a un gène lambda, on l'insère dans un vecteur (grosso modo un ADN avec des gènes de machinerie d'expression ) et ensuite on insère ledit vecteur dans une bactérie pour faire multiplier le gène, par les divisions cellulaires successives, les cellules bactériennes issues de la même cellule mère étant sur le papier, identiques.  [...]

vecteur de clonage et d'expression

Y a-il une différence entre vecteur d'expression et vecteur de clonage.  [...] Un vecteur d'expression contient des régions promotrices et des séquences régulatrices permettant la transcription et la traduction de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur d'expression

Je n'ai pas vraiment compris comment on fabriquait un vecteur d'expression. Je m'embrouille avec ces histoires d'enzymes de restriction et de gènes codant pour la résistance à l'ampicilline, etc.  [...] binase -) comme ça l'exogène ne va pas s'intégrer dans le génome de la bactérie en plus pour exprimer des protéines la souche doit être protéase - pour ne pas dégrader le produit d'expression.  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction d'une banque d'ADNc

contrôle-qualité de l'ADN recombinant. transformation dans E. coli, sélection des clones recombinants et extraction du vecteur d'expression.  [...] Les cDNA clonés sont traduits en protéines par expression dans E.Coli et les protéines recombinantes ainsi exprimées sont détectés par.  [...]

[Biologie Moléculaire] Détection d'une protéine

j'ai cloné une séquence d'ADN dans un vecteur d'expression directionnel (Kit Invitrogen pcDNA3.1).  [...] j'ai ensuite séquencé mes produits d'amplification (amorces dessinées spécifiquement en 5' et 3' de mon insert) pour vérifier que mon insert était correct et surtout entier. Et là, problème ma protéine est tronquée de 4nulcéotides... (sans doute dû à une mauvaise hybridation de mon amorces et donc mauvaise amplification.   [...]

[Biologie Moléculaire] clonage pCR sequnsage

je ne sais pas quand est ce on utilise les enzymes de restrictions sur la totalité de l adn pour obtnir des fragements quand va cloner dans un vcteur (bacteri par exmpl) et quand est ce que on cherche un seul fragements d adn pour le clonr et comment on procede pour le chrcher.  [...] on dit qu on utilise la PCR dans le clonag dans qu el niveau et on multiplie quoi on sit que le promotur du vecteur va faire la multiplication t l 'expression d tous l adn rcombinant donc a quoi sert la PCR et l sequensage quand st que on l utilise avant ou aprs clonage.  [...]

[Divers] Virothérapies

Reste encore une autre approche impliquant l'immunisation avec l'ADN codant pour l'antigène associé aux tumeurs ou le peptide, soit tout seul soit avec un vecteur d'expression appropriée.  [...] Les prendre comme vecteurs d'un intron exogène est une possibilité. Mais ça revient à de la thérapie génique élargie - on ne cherche pas à soigner la cellule cible, juste à la modifier pour déclencher / amplifier une réaction immunitaire.  [...]

vecteur d'expression

Par définition, une cellule transformée à déjà reçu du matériel génétique par transformation, en général un vecteur d'expression.  [...] Je ne suis pas sur de comprendre. Le vecteur d'expression est le gène qui code pour la protéine recombinante ou bien c'est un fragment d'ADN qu'on ajoute en plus pour amorcer la transcription.  [...]