• Forum - ADN, Transformation, Bactéries, Espèces

[Microbiologie] Transfert de gènes par conjugaison/transformation

Dans la transformation l'ADN n'est pas échangé entre deux bactéries comme dans la conjugaison mais introduit à partir du milieu extérieur dans une bactérie réceptrice.  [...] L'ADN transformant et l'ADN de la bactérie réceptrice doivent être similaires et la transformation n'est possible qu'entre bactéries d'une même espèce ou qu'entre bactéries appartenant à des espèces voisines.  [...]

[Biologie Cellulaire] gène qui s'intégre au chromosome

Rarement peut-être, mais dans le cas de la transformation, l'ADN bicaténaire est dégradé par un exonucléase. Un unique brin pénètre le cytoplasme et s'intègre au chromosome bactérien (si les bactéries sont d'espéces proches).  [...] Je veux dire par là, qu'il est dit que les bactéries peuvent acquérir de nouveaux gènes de résistance lors de la transformation. Or, le problème énoncé plus haut m'amène à me demander qu'est-ce qui rajoute des nucléotides complémentaires au gène rajouté ou est-ce que ça ne pose aucun problème qu'il y ait un trou dans la séquence d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

Donc effectivement, on peut avoir culture sur le contrôle puisque le vecteur est résistant à l'ampicilline (j'ai tendance à pas mal m'embrouiller avec tout ça). D'après ce que tu dis pour le contrôle négatif, un vecteur qui n'a pas inséré d'insert ne va pas entrer dans les bactéries lors de la transformation bactérienne et du choc thermique Le vecteur ne peut pas entrer seul dans les bactéries.  [...] La seule chose que je peux te dire c'est que la manip de transformation des bactéries par le vecteur seul a raté, et qu'un très faible nombre de colonies a donc pu se développer. Par curiosité, combien de colonies par µg d'ADN as tu obtenu dans le contrôle et dans la transformation avec vecteur + insert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage en plasmides de grande taille via Sfi I (astuces)

ma ligation est optimisée (sur la nuit), rapport vecteur/insert 1.10. mes bactéries sont compétentes108B/µg ADN. après transformation, aucune colonie.  [...] Enfin, je recommande les bactéries thermocompétentes (je fuis comme la peste les électro...), et en contrôle je concentre mon reliquat de bactérie transformée et je ré-étale le tout si les clones sont négatifs. J'ai parfois eu de bonnes surprises comme ça.  [...]

Transfert horizontal gene

Les transferts de gènes sont déjà très utilisés en génie génétique. que ce soit transduction (un virus sert de vecteur entre deux bactéries), conjugaison (contact via des pili entre deux bactéries) mais surtout transformation (une bactérie prélève de l'ADN dans son milieu de vie).  [...] C'est simplement. transfert horizontal de gènes, donc je pensais parler de la syncitine avec un point de vue évolutif mais aussi de la bactérie Zobellia.  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur

Les bactéries contenant les plasmides sont mises en culture dans un grand volume (jusqu'à 2 litres de milieu de culture). Quand la concentration bactérienne atteint une valeur suffisante, on traite par un antibiotique (comme le chloramphénicol) qui empêche la croissance bactérienne sans affecter la réplication des plasmides.  [...] Les bactéries peuvent être placées dans certaines conditions physico-chimiques pour permettre aux plasmides d'être incorporés à l'intérieur de celles-ci. Les bactéries traitées et prêtes à recevoir l'ADN étranger sont appelées bactéries compétentes. L'incorporation des plasmides dans les bactéries est appelée transformation bactérienne.  [...]

isolation d'un plasmide

S'assurer que la bactérie ne possède pas de plasmide avant la transformation Et bien en principe, elles ne possèdent pas le plasmide d'intéret (logique). Tout autre plasmide nous est indifférent. Ce que l'on fait en pratique, c'est que l'on verifie après coup que les bactéries que l'on a selectionnées portent bien l'insert d'intéret (digestion de restriction, séquencage).  [...] Les bactéries compétentes utilisées pour la transformation et l'amplification ne possédent pas de plasmides... pour t'en rendre compte, fait, à partir d'une colonie, une culture de bactéries non transformées d'une part et transformées d'autre part... fait ensuite une miniprep d'ADN plasmidique.  [...]

Intégration dans un plasmide

L'ADN circulaire pénètre plus facilement dans des bactéries (préparées pour la transformation. on dit qu'elles sont compétentes ) que l'ADN linéaire.  [...] Je ne pense pas qu'il soit possible d'insérer dans une bactérie hôte un ARN linéaire, sauf si on utilise un phage comme vecteur. Dans ce cas si, tes rendements sont drastiquement augmentés car la transformation de bactérie compétente est relativement peu rentable.  [...]

[Biotechnologie] Construction plasmidique

Suite à cela, ne pas oublier de désaler le produit résultant de gibson assembly si tu fais la transformation bactérienne ensuite par électroporation. Donc maintenant transformation de tes produits dans des bactérie compétente. Puis culture. Puis miniprep. Puis digestion pour voir si ta les bons plasmides dedans, puis t'envoi donc les bon clones au séquençage.  [...] Mon cour traite en fait des différents plasmides, et des éléments qui le compose ( promoteur fort ou non, adn polymérase, gène de resistance etc...) ainsi que les transformation génétique chez les levures et bactéries.  [...]

PCR sur colonie après insertion chromosomique... ?

Tu n'es jamais sur de ce qu'il y a dans tes boites, il y a de nombreuses bactéries possédant des résistances antibiotiques, pour peu que tu ais manipulé du mieux possible mais qu'une bactérie qui ne vienne pas de ton étalement se soit retrouvé dans ta boite de pétri, tu as peut être une bactérie résistate a la kanamycine et qui ne vienne pas de ce que tu as transformé, qui se soit retrouvé en culture.  [...] deuxièmement, les mutations spontanées ça arrive, alors même si tu était en milieu stéril ++ et qu'aucunes bactéries externes ne s'est retrouvée dans ta boite, il y a tout de même un risque (très faibles, certes) que une de tes bactérie electroporée mais pour laquelle la transformation aurait pas réussi (donc qui ne contiendrai pas ton gène) se retrouve spontanément résistantes à la kanamycine (sans lien avec les résistances que tu insère avec ton ADN linéaire).  [...]