• Forum - ADN, Solution, éthanol

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN plasmidique

L'ADN chromosomique et les protéines dénaturées sont précipités par 150 µl d'une solution d'acétate de potassium 3 M pendant 5 minutes à 4°C puis éliminés par centrifugation (1000 g pendant 5 minutes à 4°C).  [...] Un volume d'éthanol 100% froid est ajouté au surnageant afin de précipiter l'ADN plasmidique pendant 5 minutes à température ambiante. Après 5 minutes de centrifugation à 10000 g, le surnageant est éliminé et le culot est lavé dans une solution Tris 0,1 M / éthanol 70% puis dans l'éthanol 100%.  [...]

Extraction de l'ADN

L'ARNase sert à dégrader L'ARN il est utiliser au début de l'extraction Si on utilise un protocole de phénol chloroforme on peut grâce au phénol éliminer l'ARN degradé et les protéines.   [...] dans le cas de salting out on ajoute du NACL concentré pour précépiter les protéines et on récupère la solution contenant l'ADN + ARN dégradé puis on précipite l'ADN grâce à l'éthanol absolu et on se débarrasse de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Questions variées...

C. l'absorbance de l'ADN est il maximum au Tm ( cela ne me semblerait pas logique car l'absorbance devrait, selon moi, être maximale lorsque les brins d'ADN sont TOTALEMENT dissociés, or le Tm est la temperature de demi-dénaturation...).  [...] D.L'ADN en solution précipite lorsqu'on augmente la force ionique. (V ou F je ne sais pas le rapport à la force ionique, je pensais qu'on précipitait uniquement l'ADN avec l'ethanol).  [...]

[Identification] Extraction d'ADN

Homogénéiser doucement le contenu de l'Erlenmeyer, puis transférer 10 mL de ce filtrat dans l'éprouvette. Ajuster ensuite le volume jusqu'à 40 mL avec la solution froide d'éthanol à 90° (verser très délicatement et lentement la solution d'éthanol).  [...] 3) Le fait d'écraser le kiwi en ayant éliminé la partie centrale, permet de libérer les cellules et de les écraser afin d'en libérer le contenue, ce qui donne avec le mélange des produits, la solution finale.  [...]

[Biologie Moléculaire] travaux pratiques, isolation plasmide

alors pourquoi on a utilise l ethanol 96% et puis 70% quelle la difference entre eux et quel est le rol dethanol et pourqoi pas 70% puis ^96%.  [...] L'éthanol 70% permet de faire précipiter l'ADN. On utilise d'abord de l'éthanol 96% (ou plus concentré) car on le rajoute en général à un volume de solution aqueuse qui contient l'ADN (souvent après une étape de phénol-chloroforme) et qui va diluer un peu l'éthanol.  [...]

[Biologie Moléculaire] Alcool isoamylique

Là où je ne vous suis plus c'est que l'isopropanol n'aurait pas la même fonction, il remplacerait plutôt l'éthanol absolu qui vient dans l'étape suivante pour précipiter le plasmide.  [...] L'isoporopanol peut effectivemet être remplacé par l'éthanol, mais à 100%et non 70%. L'avantage de l'isopropanol par rapport à l'Ethanol est de pouvoir deshydrater l'ADN avec un volume moindre d'alcool. C'est pour cela que lors d'une précipitation à l'éthanol on rajoute 2 volumes d'Ethanol 100% pour 1 volume de solution contenant l'ADN (ce qui donne 70% env.  [...]

Conservation d'ADN

J'ai cherché un peu sur internet et je suis tombé sur plusieurs site qui me disais de le conservé dans un tampon de tris (trishydroxyméthylaminométhane ) et d'EDTA à un pH=8.  [...] Malheureusement je n'ai trouvé aucune autre information. Combien je dois peser si je veux une solution de 1L et combien mettre d'EDTA (les formules me suffise je peux faire le calcul par la suite) Et aussi j'ai extrait mon adn avec du sel du vinaigre et je l'ai fait précipité avec de l'éthanol, est-ce que ça des risque d'interférer avec mon tampon Et pour finir, je vais le doser par spectrophotométrie UV, est-ce que mon tampon risque de brouiller l'analyse (même si je fais un blanc).  [...]

comment préparer une solution 0,24% p/v d'éthanol?

J'ai un lab où on me demande de préparer une solution contenant 0.24% p/v d'éthanol et 0.12% p/v d'acétone. Puis à partir de cette solution,préparer une dizaine de dilutions pour couvrir uniformément l'intervalle entre 30% et 300% de la limite légale en éthanol qui au Canada est de 0.08% (0,8mg/ml).  [...] pour les dilutions je sais que ma concentration la plus élevée sera de 2.4mg/ml (300%) et la moins concentrée sera 0.24mg/ml (30%) mais je ne sais pas comment faire pour calculer le volume à prélever à chaque fois pour préparer les autres dilutions.   [...]

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse?

Il a été montré qu'on pouvait précipiter l'ADN a temperature ambiante avec la meme efficacité qu'a -20°C. Cette croyance proviens du fait que l'ethanol deviens plus visqueux a basse temperature, mais ca n'a pas d'influence sur l'efficacité de précipitation.  [...] Tu aurais une référence sur ce que tu dit (pour pouvoir intégrer cette donéne dans une rédaction tout en jsutifiant la source).   [...]