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[Biochimie] Trypsine ou Pronase

J'ai un TP de biochimie à faire où on doit purifier de l'ADN et à une certaine étape, on ajoute de la pronase à l'ADN pour briser les peptides en solution. Par la suite, on fait une extraction au phénol/chloroforme pour enlever les protéines et lipides de la solution contenant l'ADN. Alors, j'aimerais savoir.  [...] 1. Si on utilise de la trypsine au lieu de le pronase, cela fait en sorte que les protéines sont hydrolysées en de moins petits fragments. Ma question est. quel impact le fait d'avoir des fragments de protéine plus gros a sur le reste de la purification Est-ce que l'extraction au phénol/chloroforme sera moins efficace Si oui pourquoi.  [...]

Extraction de l'ADN

S'il vous plait est ce que quelqu'un peut me dire si le Nacl permet l'élimination de l'ARN ou des protéines lors de l'extraction de l'ADN.  [...] dans le cas de salting out on ajoute du NACL concentré pour précépiter les protéines et on récupère la solution contenant l'ADN + ARN dégradé puis on précipite l'ADN grâce à l'éthanol absolu et on se débarrasse de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN

je pense qu'avec de la soude (ou une autre solution alkaline) il est aussi possible d'extraire de l'ADN de coupe car la soude détruit les protéines et l'ARN mais n'altère pas l'ADN donc.  [...] en fait je compare plusieurs façons d'extraire l'ADN à partir de coupes de tissus paraffinés. et pour l'instant j'ai essayé la technique classique au phenol/chlo et les deux kit précédemment cité.  [...]

Besoin d'aide pour compréhension d'un article

Methode d'extraction au phenol-chlorophorme au SDS-protéinase K. On veut extraire l'ADN. On va mettre du phénol chloroforme dans notre echantillon pour précipiter les protéines. L'ADN reste en solution dans la phase aqueuse qui est récupérée par centrifugation.  [...] Ensuite on ajoute de l'ethanol pur qui précipite l'ADN puis récupérée par centrifugation. Ensuite ils ont rajouté une protéinase K pour détruire toute les protéines.  [...]

[Biotechnologie] Souches d'expression et préparation de plasmides

On neutralise ensuite rapidement la solution, ce qui provoque la rénaturation brutale (réappariement des brins du duplex d'ADN). L'ADN chromosomique, très long (~10v pb), ne parvient pas à se réapparier complètement et forme des enchevètrements insolubles.  [...] L'ADN plasmidique, court (~10³ pb), parvient à se reformer et reste en solution. On sépare alors les espèces par centrifugation. Les protéines précipitées, sont également éliminées avec le détergent et l'ADN chromosomique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mesure de pureté d'une préparation d'ADN aberrante?

J'avais pensé à une contamination par autre chose que des protéines, mais je vois mal ce qui a pu contaminer en absorbant à 260 pile, et ni à 280 ni à 320. Et surtout qu'est-ce qui peut contaminer mon ADN, à part des protéines Des restes de la lyse des hépatocytes Un truc de la solution tampon.  [...] Avez vous effectué plusieurs fois vos mesures Le fait est que vous avez de faibles DO, le rapport n'est peut être pas significatif. Il suffit que votre quantité d'acide nucléique soit un peu surévaluée et que celle de vos protéines soient un peu sous évaluées et ça peut donner ça.  [...]

Extraction de l'ADN

[COLOR= Plum ]Bonjours,je voudrais savroir pour quoi au cours de l'extraction de l'ADN génomique d'Arabidopsis thaliana.aprés broyage du tissu et la mises de la solution de lyse,pour précipitation des protéines,on doit incuber le mélange dans une étuve et pour quoi exactement à 65°C [/COLOR ].  [...] Peut-être est-ce une température suffisante pour dénaturer les protéines partiellement tout en restant inférieur au Tm de ton ADN.  [...]

isolation d'un plasmide

On tamponne la soude avec de l'acétate de potassium. Les macromolécules (ADN génomique + protéines) peuvent se renaturer. Leur grande taille fait que cette renaturation ne permet pas de retrouver leur conformation native et il se forme un précipité blanc floconneux.  [...] Tout agit avec tout. L'ADN plasmidique, plus petit et plus compact peut retrouver lui sa forme native et reste exclu du précipité. Dés lors, un étape de centrigugation permet de séparer le plasmide (et les petites protéines et des ARNs) restés en solution, du reste précipité au fond du tube.  [...]

[Génétique] chromosomes

j'ai une question qui me trotte et je ne trouve pas de solution, en fait on sait que les chromosomes sont constitués des deux brins d'ADN enroulés au tour de protéines, sauf qu'on sait que l'origine des chromosome est différente, la moitié viens de chez la mère et l'autre de chez le père, donc ma question.  [...] Promoteurs tissu spécifique, condensation de la chromatine,... C'est un peu le serpent qui se mord la queue. des protéines issues de l'ADN viennent le réguler. L'environnement influence le tout dans une régulation fine.  [...]

Mémoire en génétique : questions diverses

je dirais que l'ADN renferme la notice de fabrication des protéines, ces protéines sont un ensemble d'acides aminés les uns a la suite des autres et le but de l'ADN c'est de dire pour cette protéine, on d'abords mettre tel acide aminé, ensuite on va mettre celui ci,  [...] J'ai compris le principe de la lyse cellulaire, mais je n'arrive pas à bien cerner l'élimination des protéines. En gros, après la lyse des cellules, on obtient une solution visqueuse formée de longs filaments d'ADN. Mais j'ai vu qu'ensuite, par l'ajout de phénol, on obtenait une solution biphase aqueuse/organique.  [...]