• Forum - ADN, Plasmide, Enzyme, Restriction

[Biologie Moléculaire] enzyme de restriction

est il possible d insérer un fragment d adn dans un plasmide linéarisé par une enzyme de restriction non palindromique.  [...] sinon on peu toujours remplir ou grignoter les extremités ce qui les rends franches et permet le clonage de n'importe quoi.   [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Je mal à comprendre comment peut on jouer sur les séquences, et faut il toujours commancer par le triple ATG des amorces pour faire la PCR et la place de la PCR dans la vérification de l'intégrité des plasmides.  [...] Je ne comprend pas bien ta question. Pour construire un plasmide recombiannt tu as besoin de ta séquence d'intêret c'est à dire celle que tu veux intégrer dans le plasmide. Tu l'obtiens en l'amplifiant par PCR ou en digerant directement ton ADN par une enzyme de restriction.  [...]

microbiologie (sens anti-sens)

merci pour votre reponse,oui effectivement, mais au fait vous m'avez mal compris, quand j'ai dit sens ou anti sens c'été par rapport a une cartographie de restriction, on a un brin d'ADN qui a été placé dans le plasmide (on sais pas si il a été placé dans le bon sens), on ajoute une enzyme de restriction ((ECOr, bamhI.  [...] dans le cours c'était que le plasmide n1 a été dans le bon sens mais le 2 eme était anti-sens, mais je ne sais pas comment il (prof) definit que c'était sens ou anti sens juste avec les tailles.  [...]

ADN de séquence inconnue, choix des enzymes de restriction.

Grosso modo, vous avez un fragment d'ADN que vous souhaitez faire rentrer dans un plasmide. Vous ne savez pas comment il a été obtenu, vous ne connaissez pas son état. Pour le faire entrer dans un plasmide, il va vous falloir ouvrir le plasmide en utilisant une enzyme de restriction dont il existe deux types.  [...] Comme vous n'avez aucune idée de la carte de restriction de votre fragment, il est déconseillé de digérer par une enzyme, vous risquez de le casser. En revanche, vous pourrez toujours l'insérer dans un plasmide ouvert avec une enzyme générant une extrémité franche, sous réserve qu'il ait lui même les extrémités franche. Or vous ne savez rien de cela.  [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

j'ai du mal à comprendre une notion de mon cours malgré les explications de ma prof. pourquoi l'ADN du plasmide et celui de l'organisme dont on veut cloner le géne sont-ils découpés avec la même enzyme de restriction.  [...] On prélève l'insert (le gène à cloner) grace a une enzyme de restriction qui va cliver l'ADN sur des sites de restriction spécifique (c'est une séquence palindromique). On peut ensuite amplifier l'insert par PCR. puis l'insérer dans le polylinker avec une ligase.  [...]

[Divers] clonage et maths

Le problème avec le clonage d'un fragment d'ADN c'est que le matériel n'est pas classiquement présent dans un lycée (pas de bactérie, pas de plasmide, pas d'enzyme de restriction). Vous pourriez éventuellement tenter de trouver un labo qui veuille bien vous accueillir 3 demies journées pour vous faire faire un clonage (il serait bien sympa ce labo).  [...] On retrouve aussi des math au moment où l'on s'intéresse à combien d'enzyme on met (restriction, ligase) et combien on a de sites, de restriction, de ligation, combien de temps on veut prendre etc... Jusque là c'est finalement que des changements d'unités, des règles de trois.  [...]

[L1 BIO] TP Biologie moléculaire

Puis après on décide de faire une carte de restriction,en faisant une digestion enzymatique par l'enzyme de restriction xho1,cette enzyme se trouve de base dans le plasmide recombinant et aussi dans la séquence de l'ADN de la GFP mais pas dans celui de la Dsred.  [...] La carte, c'est l'interprétation que tu en fais, c'est-à-dire la disposition des différents sites de restrictions sur ton plasmide avec la distance séparant chacun des sites que tu as placé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène0 AOX1!!

1) Enzyme de restriction spécifique à AOX1 ainsi qu'au plasmide vecteur de clonage. Donc découpage des deux au bon endroit.  [...] 2) Insertion du promoteur dans le plasmide et reapariment de base car notre enzyme de restriction est spécifique et a couper notre fragment au bon endroit.  [...]

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

Ma question du jour, c'est de savoir le mecanisme d'action d'une ADN ligase en général et dans mon cas pour le clonage d'un géne d'interet dans un plasmide (PICZ) qui sont les deux digérés par les mémes enzymes de restriction (SFII et NOTI).  [...] - Traitement du plasmide receveur avec les enzymes de restrictions, puis traitement à la phosphatase alcaline (aussi cela évitera que le plasmide se recircularise quand vous rajouterez la ligase et l'ATP.) et purification.  [...]

[Biologie Moléculaire] mutagènese, transformation, transfection

Ce que je comprends c'est que vous avez fait une mutagénèse dirigée par PCR à partir d'un plasmide X. Pour éliminer le plasmide matrice X vous avez utilisé la spécificité de l'enzyme de restriction DpnI pour les sites méthylés. Ainsi, l'enzyme a digéré le plasmide matrice, produit en bactérie (donc méthylé) et pas le plasmide produit par PCR, non méthylé.  [...] Pour vérifier une mutagénèse sur un petit insert (d'un ordre de grandeur inférieur au 10Kb) le plus simple est de faire quelques restrictions et un séquençage. Vous n'avez pas fait de séquençage du Bluescript.  [...]