• Forum - ADN, Intérêt, Plasmide

[Biochimie] Manipulation de l'ADN: plasmide

Les plasmides utilisés en recherche sont souvent des plasmides très modifiés par les sociétés qui les vendent. Afin de pouvoir insérer facilement des portions d'ADN d'intérêt dans le plasmide, on a prit l'habitude de placer des sites de restriction. C'est à dire des sites reconnus par des enzymes capables de couper l'ADN.  [...] L'intérêt est de couper ET notre morceau d'ADN d'intérêt ET le plasmide avec le MÊME enzyme de restriction. Ainsi lorsqu'on les mets en présence l'un de l'autre, ils auront tendance à s'attacher et nous permettre de refermer le plasmide nouvellement constitué.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

cette technique permet de fusionner la GST avec une protéine d'intérêt pour par exemple étudier les partenaires protéiques,  [...] Pour cela on clone dans un plasmide l'ADN codant pour la GST et l'ADN codant pour la protéine d'intérêt, de cette sorte les deux protéines sont fusionnées (elles sont accrochées l'une à l'autres).  [...]

Demande d'aide pour un exercice

En 1953, Watson et Crick élucidèrent la structure de l'ADN. Cette molécule comporte deux brins polynucléotidiques antiparallèles, enroulés autour d'un axe, formant ainsi une double hélice. Les deux brins s'associent spontanément grâce à la complémentarité de leurs bases qui s'apparient par l'intermédiaire de liaisons hydrogène.  [...] L'ADN porte l'information génétique nécessaire à la synthèse des molécules du vivant. C'est une structure dynamique. Certaines techniques de biotechnologie, dites recombinantes, manipulent sa structure. Elles font intervenir des endonucléases, pour couper l'ADN plus ou moins précisément, et des ligases pour rassembler les séquences d'intérêt dans un plasmide ou ADN circulaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ribosonde

- La séquence d'intérêt clonée dans un vecteur (plasmide, ADN donc) contenant un promoteur viral (T7, T3 et SP6 sont les plus utilisés).  [...] - Mélanger les ingrédients afin d'obtenir une réaction de transcription de la séquence d'intérêt à partir du promoteur viral. Lors de la transcription, l'UTP radioactif sera utilisé et l'uracile marquée sera ainsi incorporée à l'ARN.  [...]

liposome

je fais un pTPE sur la thréapie genique et j'aimerais avoir un peu plus de precision sur les liposomes, je ne comprends pas comment cette méthode permet d'integrer le gene medicament au noyau.   [...] Et donc ça permet de faire rentrer l'ADN d'intérêt dans la cellule. Mais il ya beaucoup d'autres techniques pour faire rentrer un plasmide ou un gène dans une cellule.  [...]

PSDM (PCR mediated Site-Directed Mutagenesis)

La PCR RFLP est une méthode d'analyse de polymorphismes parmi des séquences d'ADN homologues. C'est à dire qu'on fait une PCR sur chaque et qu'on digère les produits avec des enzymes de restriction. Ces produits digérés sont déposés sur un gel pour les faire migrer et comparer les profils de digestion les uns avec les autres.  [...] La PSDM est un outil de modification de l'ADN, elle est utilisée notamment pour modifier la séquence d'un gène d'intérêt dans un plasmide pour pouvoir étudier les effets d'une mutation donnée. Voir par là.  [...]

[Biologie végétale] Compréhension d'un article sur les OGMs

Dans le cas du plasmide Ti d'agrobactérium, de manière similaire on y ajoute notre gène d'intérêt qui va remplacer l'ADN-T, ce plasmide est réintégré au sein d'agrobactérium et ce dernier infecte ensuite une plante et transfert l'ADN-T, on obtient donc comme ça un OGM.  [...] 2) En 2.4 ils parlent de deux méthodes. Freeze-thaw et leaf disc. Le freeze thaw permet simplement de briser les cellules d' Agrobacterium tumefaciens pour que les vecteurs contenant le gène d'intérêt (qui remplaceraient donc le plasmide Ti ) entrent dans la cellule.  [...]

[Biotechnologie] recombinaisons site spécifiques par la technologie Gateway

dans un plasmide jouant le rôle de vecteur donneur et un fragment d'adn contenant le gène d'intérêt flanqué par deux autres sites attB1, attB2 (produit par PCR).  [...] Après recombinaison, le gène d'intérêt a donc été transféré sur le plasmide donneur est cette fois flanqué de deux sites attL1 et attL2 qui sont les produits de la recombinaison. c'est le clone d'entrée.  [...]

[Biochimie] Méthode Cre-Lox : application ?

On insère les sites LoxP de part et d'autre du gène d'intérêt par recombinaison homologue. C'est à dire qu'on prend la séquence des parties flanquants le gène, pour chacune d'elles, on y ajoute le site LoxP. Chaque séquence modifiée (une par partie flanquante) est intégrée dans un vecteur (plasmide ou virus).  [...] Les cellules sont transfectées (plasmide) ou transduites (virus). Une fois l'ADN exogène dans le noyau, les parties homologues vont s'intégrer au niveau d'un des deux brins d'ADN du gène d'intérêt par recombinaison homologue (voir les protéines BRCA2, Rad50, Rad51 pour la compréhension de ce processus chez l'Eucaryote supérieur) car elle correspondent précisément aux séquences des parties flanquantes.  [...]

[Microbiologie] Superhélicité de l'ADN

D'après ce que j'ai compris la superhélicité Ã = LK/LK0 avec LK le nombre de fois où les deux brins d'ADN se croisent et LK0 = nb pb/10,45 pb. On prend un plasmide pBs qu'on met dans deux souches mutantes. une qui n'exprimera que la topA (topoisomérase I) et l'autre souche n'exprimera que topA et parC (topoisomérase IV).  [...] On retire le plasmide des cellules et le but est de savoir combien de molécules ont tant ou tant de supertours. Ils mettent de la chloroquine qui s'intercale entre les deux brins d'ADN et qui fige tout de la même manière (je vois pas trop son intérêt.s).  [...]