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[Biologie Moléculaire] Réplication de l'ADN chez les eucaryotes SOS

juste un petit hic tu me dis que le fragment de Kleenow est une enzyme amputée de sa fonction exonucléase 3'5' et pourtant dans mon cours il est explicitement écrit. Le fragment de Kleenow est une sous-unité de l'ADN polymérase I. Il a une activité polymérase 5'3' et une activité exonucléase 3'5' Ce il ne peut correspondre qu'au fragment de Kleenow car si ça avait visé l'ADN polymérase I cela aurait été elle.  [...] L'ADN polymérase a en plus une activité exonucléase 5'-3' (que n'a pas le fragment de klenow). elle lui sert à retirer l'amorce d'ARN quand elle en rencontre une, pour la remplacer par de l'ADN. Mais ce n'est pas une fonction de réparation.  [...]

fragment d'Okazaki

L'ARN pol va donc synthétiser des brin d'ARN a reculon ( les fragments d'Okasaki) possédant alors une extrémité 3'Oh libre a partir de laquelle l'ADN pol viendra polymériser par complémentarité...Avec se mécanisme on peut donc répliquer l'ensemble du brin.  [...] Rq. Lorsque l'ADN pol 3 arrive au niveau d'une amorce d'ARN elle est remplacé par l'ADN pol 1 qui posséde une fonction exonucléasique 5'-3' est qui digére l'amorce d'ARN (fragment d'okasaki) pour la remplacer par de l'ADN. Une ligase éffectue liason phosphodiester pour entre les différent morceaux.  [...]

DNA polymerase

- L'enzyme de Kleenow. c'est une DNA polymerase sans fonction d'edition (qui est pour moi la fonction exonucléasique 3'-5') Sur ce point j'aimerais savoir si c'est en effet la fonction 3'-5' ou la 5'-3' qui lui manque.  [...] Le fragment de klenow est l'ADN poly I qui a été traitée par la tripsine, ce qui permet de lui enlever la sous-unité qui a l'activité exonucléasique 5' 3'. Cette fonction est souvent genante quand on utilise l'ADN poly I in vitro.  [...]

Mutation?!

Concernant les séquences consensus, je pense que la TATA box en fait partie étant donné qu'on la trouve dans quasiment tous les promoteurs de nos gêne et donc pour moi si il y a changement au niveau de ce fragment d'ADN, on ne parlera plus de polymorphisme mais plutôt de mutation car cela affecterait largement la transcription du gêne soit en sur-exprimant ou en l'inhibant et cela se refléterait sur le phénotype, enfin je pense.  [...] La TATA-box n'est pas un fragment d'ADN. Elle remplit une fonction, mais n'est pas séparée physiquement (càd ne représente pas un fragment qui se balade dans la cellule).  [...]

[Génétique] Electrophorèse-ADN

Non le SDS n'est pas utilisé pour l'ADN qui est déjà chargé négativement. On peut jouer sur la dilution du gel d'agarose pour séparer plus ou moins bien les différents fragments d'ADN qui seront séparés selon leur taille.  [...] L'ADN linéaire migre en fonction de la taille du fragment sans autre ajout. Pour être plus précis, la charge du fragment augmente avec la taille. Les fragments les plus gros devraient donc avoir une migration facilitée. cependant, la résolution du gel freine plus les gros fragments que les petits.  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction Banque ADNc

Normalement c'est le fragment de Klenow qu'on utilise généralement sous le terme ADN pol I, non L'ADN polymérase I est une enzyme qui d'une part polymérise l'ADN à partir d'une matrice mais qui d'autre part coupe l'ADN grâce à son activité exonucléasique 5'-3'.  [...] Pol I normalement on l'utilise pour Nick Translation (agit sur la brèche, ca synthétise sur le côté 3' de la brèche et ca désassemble sur le côté 5' de la brèche) si je ne me trompe pas, ca remplace purement et simplement de l'ADN ou de l'ARN par une copie identique (à ceci près que dans Nick translation on peut ajouter des marqueurs radioactifs).  [...]

[2nde] L'ADN...

Moi j'ai pensé. La fonction initiale du fragment d'ADN est de multiplier le nombre de bactérie. Non elle n'est pas la même après transfert puisque ça a permis la multiplication de ces bactéries.  [...] Le fragment d'ADN code pour la protéine transformée, il rend les bactéries fluorescentes (vertes) sous les UV et permet de reconnaitre les bactéries transformées des autres non transformées.  [...]

[Biochimie] differencier deux gel d'agarose de concentration différente

l'utilisation de gel d'agarose à forte concentration (3 à 4%) est nécessaire pour des fragments inférieurs à 150 pb, car elle permet une meilleure séparation et résolution des différentes bandes en fonction de leur différence de taille.  [...] A l'inverse il faudra que le gel soit peu concentré pour séparer des gros fragments (simplement pour leur permettre de passer à travers du gel), mais dans ces conditions on perdra les petits fragments qui migreront tellement qu'ils risquent de sortir. Tout est affaire de choix par rapport à ce que tu souhaites faire migrer, pour l'ADN il existe des tableaux indicatifs donnant la gamme de pourcentage en agarose adaptée en fonction de la taille du ou des fragment(s) d'intérêt.  [...]

[Génétique] Rflp

2)-. un fragment de restriction est un fragment qui contient un ou plusieurs genes, ou c'est de l'adn intergenique ( qui ne contient donc pas de genes ).  [...] 2) un fragment de restriction peut être n'importe quel morceau d'ADN, qu'il soit codant ou non codant. La présence de sites n'a absolument rien a voir avec la fonction de l'ADN.  [...]

[Génétique] Détection de SNP par TaqMan sur de l’ADN génomique problème?

Je dois déterminer des SNP par PCR TaqMan. Je pars de tissus de tumeur qui on eu un traitement peu adéquat et donc mon ADN est assez dégradé. Le protocole (TaqMan SNP Genotyping Assays de AB) conseil de ne pas utiliser plus de 20ng d'ADN par puits. Mais j ai une post doc audessus de moi qui me force (stagiaire) à utiliser bien plus (de 20 a 100X plus).  [...] La PCR n'a pas fonctionné. Mais elle me dit que je dois utiliser bien plus de matériel car mon ADN est dégradé et envisage une purification par extraction sur gel pour ne conserver que les fragment ADN les plus importants.  [...]