• Forum - ADN, Extraction, Fragment

[Biologie Moléculaire] Bandes d'ADN non amplifié??

La réponse la plus simple est que ces souches n'ont pas le fragment d'ADN que tu essaies d'amplifier. Quelle type de molécule supporte ce fragment (chromosome, plasmide) Est-ce une PCR colonie ou sur une extraction Il peut aussi s'agir de la présence d'inhibiteurs de PCR dans les extractions d'ADN des souches qui semblent négatives.  [...] Merci d'abord pour ta réponse, c'est vrai que l'amorce est incompatible, c'est une possibilité, c'était une RAPD, il s'agit d'ADN total extrait, et le problème c que d'autres souches sont négatives sans monter cette bande d'ADN.  [...]

[Génétique] Détection de SNP par TaqMan sur de l’ADN génomique problème?

Je dois déterminer des SNP par PCR TaqMan. Je pars de tissus de tumeur qui on eu un traitement peu adéquat et donc mon ADN est assez dégradé. Le protocole (TaqMan SNP Genotyping Assays de AB) conseil de ne pas utiliser plus de 20ng d'ADN par puits. Mais j ai une post doc audessus de moi qui me force (stagiaire) à utiliser bien plus (de 20 a 100X plus).  [...] La PCR n'a pas fonctionné. Mais elle me dit que je dois utiliser bien plus de matériel car mon ADN est dégradé et envisage une purification par extraction sur gel pour ne conserver que les fragment ADN les plus importants.  [...]

[biologie moléculaire] Southern blot

L'ADN que j'utilise pour la PCR et celui que je digere provient de la meme extraction. Donc mon produit de PCR est un fragment de mon génomique.  [...] Pour le traitement NaOH sur la membrane directement je peut pas te dire car j'ai jamais fait. Faudrai verifier que ca n'abime pas ta membrane. Sinon pour tes test sur coli pourquoi ne pas faire une extraction avant.  [...]

[Génétique] Plasmide

comment purifier le fragment linéaire apres amplification du plasmide pBR 322 dans escherichia coli et extraction de l'adn plasmidique.  [...] Lors de ta PCR t'as surement utilisé des amorces contenant des sites de restriction que tu dois utiliser donc voila tu commence par faire une digestion avec ces enzymes, tu dépose ensuite sur gel pour récuperer ton fragment, et ensuite tu purifie alors il existe plusieurs techniques de purfi pour des produits PCR recuperes à partir de gel.  [...]

[Génétique] Plusieur question?

Deux version différentes d'un même gène sont bien un allèle. Mais contrairement à l'appellation trompeuse, ils ne donneront pas une même protéine, mais une protéine différente utilisée pour une même fonction.   [...] Pour être plus précis, on peut dire qu'un fragment d'ADN est une séquence nucléotidique mais une séquence nucléotidique peut également être un fragment d'ARN. Donc ce n'est pas une équivalence stricte.  [...]

Notion de gène

c'est là qu'est l'ambiguité pour moi... tu parles d'un fragment d'ADN...alors que moi je dirais que le gène n'est pas le fragment d'ADN mais une information contenue dessus ( car un seul fragment d'ADN semble pouvoir contenir plusieur genes).  [...] A mon sens, cette definition est incomplete, car elle ne fait pas entrer la notion d'heridité, de trascribtabilité de l'element genetique et elle ne repond pas a la problematique des genes chevauchants par exemple.   [...]

[Biologie Moléculaire] Réplication de l'ADN chez les eucaryotes SOS

juste un petit hic tu me dis que le fragment de Kleenow est une enzyme amputée de sa fonction exonucléase 3'5' et pourtant dans mon cours il est explicitement écrit. Le fragment de Kleenow est une sous-unité de l'ADN polymérase I. Il a une activité polymérase 5'3' et une activité exonucléase 3'5' Ce il ne peut correspondre qu'au fragment de Kleenow car si ça avait visé l'ADN polymérase I cela aurait été elle.  [...] L'ADN polymérase a en plus une activité exonucléase 5'-3' (que n'a pas le fragment de klenow). elle lui sert à retirer l'amorce d'ARN quand elle en rencontre une, pour la remplacer par de l'ADN. Mais ce n'est pas une fonction de réparation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction Banque ADNc

Normalement c'est le fragment de Klenow qu'on utilise généralement sous le terme ADN pol I, non L'ADN polymérase I est une enzyme qui d'une part polymérise l'ADN à partir d'une matrice mais qui d'autre part coupe l'ADN grâce à son activité exonucléasique 5'-3'.  [...] Pol I normalement on l'utilise pour Nick Translation (agit sur la brèche, ca synthétise sur le côté 3' de la brèche et ca désassemble sur le côté 5' de la brèche) si je ne me trompe pas, ca remplace purement et simplement de l'ADN ou de l'ARN par une copie identique (à ceci près que dans Nick translation on peut ajouter des marqueurs radioactifs).  [...]

[Divers] clonage et maths

Je veux bien t'accorder que le clonage d'un végétal ou celui d'un fragment d'ADN soit quelque chose d'intéressant à montrer aux camarades du lycée (pff, je suis vieille...), mais est-ce que tu crois que ça a un lien avec ton sujet Ou tu veux montrer quoi Qu'on peut cloner un végétal relativement facilement, mais pas un humain... Dans ce cas, faudrait comparer les deux.  [...] Le problème avec le clonage d'un fragment d'ADN c'est que le matériel n'est pas classiquement présent dans un lycée (pas de bactérie, pas de plasmide, pas d'enzyme de restriction). Vous pourriez éventuellement tenter de trouver un labo qui veuille bien vous accueillir 3 demies journées pour vous faire faire un clonage (il serait bien sympa ce labo).  [...]

[Génétique] ADN polymérase

Moi j'aurai dit que les 3 sont indispensables car chacune à un rôle précis, c'est vrai que l'ANN Pol 3 sert pour l'élongation de l'ADN du brin avancé et qui permet la formation des fragments d'Okazaki, mais l'ADN Pol 1 a aussi un rôle car la synthèse discontinue aboutit à une césure (lacune) entre l'extrémité 3' d'un fragment d'Okazaki et l'extrémité 5' de l'amorce d'ARN du fragment d'Okazaki suivant.  [...] La ligase vient achever le travail en catalysant la formation d'une liaison phosphodiester entre une extrémité 3'OH d'un fragment d'ADN et une extrémité5' phosphate d'un autre fragment.  [...]