• Forum - ADN, Coupe, Fragments, Enzyme, Restriction

[Biologie Moléculaire] La génomique structurale !

Après, on passe à la carte physique qu'elle consiste d'abord à détérminer également la distance entre les locus en paire de base et puis à cloner tous le génome sous formes de séquence chevauchants par utilisations d'enzymes de restriction... Mais pk cloner tous le génome tandis que, ce que nous intéresse c'est qu'un seul gène.  [...] Ils ont donc coupé, puis cloné chaque fragments de l'ADN humain (en usant à la fois d'enzyme de restriction et de séquences chevauchantes) dans des vecteurs d'expression standardisé, qu'ils ont fait séquencé (si je me souviens bien, à l'époque, il fallait faire une 20 de run -pas sur du chiffre, si quelqu'un peut confirmer- pour être un peu près sûr du séquençage des 500 premières paires de bases).  [...]

[Biologie Moléculaire] Marqueurs dominants et codominants

l'enzyme de restriction coupe au niveu du site de restriction et doit générer 2 fragments de restrictions pour le homozygotes et les hétérozygotes.  [...] on sait qu'une sonde s'hybride avec le fragment d'ADN possédant une séquence complémentaire à la sienne, par établissement des ponts hydrogène. (dans le cas des RFLP par exemple) comment est ce que certains allèles sont visible et d'autre non.  [...]

[Biologie Moléculaire] electophorese des fragements d'ADN

apres electophorese des 2 genes A et B on obtient le profil 1 alors je vois que dans le profil 1 on a migration de 2 fragement de gene B ça veut dire on a déja subit l'ADN a une enzyme de restriction qui a coupé B mais pas A (alors que ça n'est pas indiqué dans l'exercice).  [...] dans le profil 1 on a migration de 2 fragement de gene B ça veut dire on a déja subit l'ADN a une enzyme de restriction qui a coupé B mais pas A (alors que ça n'est pas indiqué dans l'exercice).  [...]

[Génétique] Dm sur la myopathie de Duchenne

Pour la question 2. tu dois d'abord savoir ce qu'est une enzyme de restriction (une enzyme qui coupe l'ADN, en reconnaissant une séquence particulière de désoxynucléotides). Les 2 allèles, sain et muté, ont-ils exactement la même séquence.  [...] Tu dois parler de fragments et non d'allèles (les enzymes de restriction ne reconnaissent pas les allèles, elles coupent en un endroit précis de la molécule d'ADN quand elles reconnaissent une petite séquence spécifique de désoxynucléotides, chaque enzyme ayant sa propre séquence).  [...]

[Biologie Moléculaire] Connaitre séquence génomique....

digestion de restriction avec plusieurs enzymes dont les séquences ne reviennent pas trop souvent (digestions simples et doubles histoire d'avoir les fragments avec plusieurs origines et fins différentes.). Tu as une idée de la complexité du génome (tu peux faire des essais pour voir la taille moyenne des fragments que tu rammènes). Tu fais une banque avec tout cela.  [...] Pour la PCR inverse, il peut être intéressant d'utiliser une 2eme enzyme de restriction située entre les 2 amorces, de manière à relinéariser le brin d'ADN circulaire. Cela facilite la PCR sur des petits fragments.  [...]

[Biologie Moléculaire] l'hybridation ADN/ADN "les différent méthodes???"

Salut, il y a one méthode qui s'appelle MLST (multi locus sequence typing) qui pourrait peut etre t'aider. Je ne l'ai jamais utilisé personellement mais je connais des gens qui s'en sont servis pour différencié deux souches de streptocoques (une porcine et une humaine).   [...] Il y a aussi la technique du RFLP. il s'agit de comparer des profils de restrictions par une enzyme à faible fréquence de coupures suivi d'une électrophorèse particulière car il s'agit de distinguer de très gros fragments d'ADN génomiques (électrophorèse en champ pulsé).  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de construction d'une banque d'ADNc

Est-ce que vous rajoutez bien la BSA qui est nécessaire pour un clivage optimal par Sfi1 Quel contrôles intra-manip avec vous fait (contrôle de clivage par l'enzyme, de recircularisation du vecteur,...) Quelles bactéries utilisez-vous pour la transformation Avez-vous fait le contrôle de base nécessaire sur la transformation des bactéries. transformation avec un plasmide contrôle.  [...] La vérification du clivage des ADNc par une enzyme de restriction peut se faire si le clivage génère des fragments de taille différente et suffisamment longs. Ainsi par migration sur gel d'agarose, la présence des bandes d'intérêt permet de valider le clivage.  [...]

[Génétique] Rflp

2) un fragment de restriction peut être n'importe quel morceau d'ADN, qu'il soit codant ou non codant. La présence de sites n'a absolument rien a voir avec la fonction de l'ADN.  [...] 3) Un profil de restriction est ce qu'on obtient apres avoir digéré de l'ADN par des enzymes de restriction et l'avoir fait migrer sur gel. On obtient des bandes qui correspondent a des fragments de restriction. pour détecter les différences alléliques par cette méthode, il faut bien sur que la différence cause une modification, une apparition ou une disparition d'un site de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzyme de restriction

Alors j'ai un plasmide qui fait 5858 paires de base et on nous dit que l'enzyme de restriction EcoR1 coupe a 1,a 948 et a 1582.On me demande de calculer la taille des fragments obtenus apres digestion du plasmide par EcoR1.Je me demande s'il faut soustraire a chaque fois du nombre total de paires de base du plasmide,le nombre de paires de base que coupe EcoR1Sachant que j'obtiens 3 fragments pour ce plasmide si je ne me trompe pas.  [...] L'idée est que tous les fragments ne sont pas nécessairement coupés. Par exemple si le site en position 1 n'est pas coupé alors vous aurez la configuration que je décrivais dans mon précédent message.  [...]

enzymes de restriction

Mais si tu lis l'anglais et selon ce qu'on te demande dans ton exposé, je te conseille de faire des recherches sur des sites anglophones. La plupart des articles scientifiques qui sont publiés, sont en anglais. Tu auras comme ça des notions récentes de ce qu'on sait des enzymes de restriction.  [...] créer une molécule de DNA (ex. plasmide) synthétique en recollant ensemble 2 fragments de DNA naturels coupés par une enzyme de restriction.  [...]