• Forum - ADN, Concentré, Quantité, Tampon

Probléme extraction ADN

Ca semble contradictoire, mais en fait c'est par titration des ions Mg2+ que ca inhibe la PCR. Si l'ADN est trop concentré alors il suffit d'augmenter la quantité de Mg2+ dans le tampon.  [...] tu as essayé de quantifier l'and contenu DANS ton produit pcr ca te renseignera ou se situe ton probleme (agarose, tampon de depot ou tampon de migration contaminés avec des dnases).  [...]

[Biologie Moléculaire] l'extraction d'ADN

Tampon de lavage. Souvent composé d'éthanol concentré, il permet de nettoyer l'ADN de ses composants sans le solubiliser.  [...] Tampon d'élution. souvent composé majoritairement d'eau. Il solubilise l'ADN après nettoyage.  [...]

[Biologie Moléculaire] bleu de Laemmli... jaune

Il y a autre chose, quand on prépare le tampon de charge il faut mettre la bonne quantité de bleu de bromophénol (poudre orange). pas assez et on obtient un bleu clair pas pratique pour le dépôt, trop de poudre et la couleur vire au jaune. Tu n'as pas eu un problème d'évaporation de ton tampon de charge qui aurait concentré le bleu de bromophénol.  [...] C'est tout de même bizarre dans la mesure où votre Laemmli est tamponné. Reste à savoir quelle est la concentration en Tris utilisé, si c'est inférieur à une dizaine de mM, cela peut se comprendre (pouvoir tampon modéré).  [...]

[Biologie Moléculaire] Southern blot !!!

Mais si la sonde, qui est en quantité saturante je crois, rencontre un ADN de saumon à peu près complémentaire, pourquoi irait-elle voir ailleurs s'il n'y a pas un ADN qui lui correspond mieux.  [...] je ne crois pas que l'adn de saumon soit en quantité saturante. Il ne faut pas oublier que ton fragment d'intérêt a migré sur un gel, et est donc concentré sur une petite surface, ce qui n'est pas le cas de l'adn de sperme. Je seche un peu quand même parce que c'est plus vraiment une technique d'actualité.  [...]

[Biologie Moléculaire] Q-CPCR encore !

Si tu as utilisé la même quantité d'ARN pour les 2 RT, alors c'est que tu as bien un différence. Par contre si tu avais pris x ul de chaque échantillon pour faire la RT, alors la il faudrait normaliser par la quantité d'ARN utilisé.  [...] edit. vu la différence de quantité d'ARN, as tu fait un gel d'ARN pour vérifier l'intégrité des ARN dans l'échantillon le moins concentré Y a t il un traitement à la DNase pour t'assurer que tu n'amplifies pas le génomique qui aurait pu cntaminer l'échantillon le plus concentré D'ailleurs les amorces chevauchent elles des jonctions exon/exon, pour éviter d'amplifier l'ADN As tu un controle sans RT (donc pour lequel il n'y a pas de cDNA et qui théoriquement ne doit rien donner en qPCR ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème d'amplification de gènes bactériens

Les causes peuvent être nombreuses...Qu'avez-vous essayé de faire pour résoudre ce problème Quelle différence y a-t-il au niveau du protocole entre l'amplification avec un seul type d'ADN bactérien et plusieurs types d'ADN bactériens, hormis la quantité d'espèces d'ADN bactérien différent dans le mélange bien entendu Mettez-vous plus d'ADN dans un cas que dans l'autre.  [...] J'utilise les memes quantites d'ADN dans les deux cas. C'est vrai que l'orsque je melange tous les ADN bacterien j'ai un materiel vraiment concentre. Mais j'ai fait les dilutions necessaire avant PCR.  [...]

[Biochimie] migration sds page

Je pense que c'est surtout un défaut de migration. En utilisant un b-mercapto neuf pour mon tampon de charge j'ai eu hier une migration nettement plus efficace. Je pense que le problème c'est surtout la quantité de glycérol dans le tampon (merci Vinc) et le fait que les lot de b-mercapto que j'avais utilisés était plus très bon.  [...] Je viens de penser a autre chose. Quand tu fais le tampon de migration. Est ce que tu vérifies sont pH Normalement avec la recette il doit être au bon pH sans que tu ai à l'ajuster, sinon il y a un problème. Mais si tu l'ajustes quand même alors fait le avec du tris concentré (Tris-Hcl ou Tris-Base selon le cas) c'est mieux que de le faire avec du Hcl.  [...]

[Biochimie] Concentré une protéine recombinante

J' ai fait plusieures purifs d'une protéine recombinante de 7 kDa. Elle se trouve dans un tampon Imidazole 500 mM. Je voudrai maintenant la concentré et la passer dans un tampon 50 mM phosphate. Question. est il possible de faire d'une pierre, deux coups et Quels sont le méthodes éfficaces pour concentré et /ou changer le tampon d'une protéine de 7 kDa.  [...] Pour concentrer les protéines, il existe des filtres de porosité donnée (je ne sais pas s'ils descendent en-dessous de 10 kDa), qui permettent d'éliminer la quantité voulue de tampon tout en retenant la protéine. On a donc bien une augmentation de la concentration de la protéine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pb de Taqman sur miRNA

(soit une concentration hypothétique de 990ng/7.5uL ou 132ng/uL dilues a 10ng/uL on prendra 2uL ou 4uL pour qPCR soit une quantité de 20ng ou 40ng).  [...] Neanmoins, dans les imprime ecran que j'ai mis, entre les deux manip j'ai divise par deux la quantite d'ADNc (20ng contrairement a 40 pour la premiere). Et rien n'a l'air de vraiment changer. Ceci dit je suis encore concentre par rapport a tes 10ng dans 20uL vu que moi je suis ds 10uL. tout ca pour dire que j'en met plus du double.  [...]

Conséquence de la concentration d'un tampon électrophorèse sur l'intensité

Or, pour moi, le TBE 10X et 20X, ce sont des tampons 10 et 20 fois plus (+) concentré que le TBE 1X (de référence). Alors je ne comprends pas comment tu peux diluer du TBE 10X en TBE 20X.  [...] Pour obtenir une tension de 90 V j'ai dilué le tampon concentré 10X (fourni avec le kit) au 20ème(conctration finale 0.5X TBE) Avec cette nouvelle concentration l'alimentation limitée à 30mA disjontait immédiatement.  [...]