• Forum - ADN, Buffer, Tampon

Rôle des composants du Edward Buffer (tampon d'extraction d'ADN)

Rôle des composants du Edward Buffer (tampon d'extraction d'ADN).  [...] - EDTA. inhibiteur des métallo-enzymes comme les nucléases qui dégradent l'ADN. Il séquestre les ions magnésium Mg2+ et bloque ainsi l'activité de nombreuses nucléases qui sont dépendantes de cet ion.  [...]

[Biologie Moléculaire] Remplacer dilution buffer?

au cours d'une determination de l'efficacité d'une réaction de marquage d'une sonde d'ADN je dois utiliser un dilution buffer pour diluer l'ADN mais le quit du DIG-labeling DNA de Roche contient seulement 3ml de ce tampon alors que j'utilise dans chaque manipe prés de 0.  [...] Si tu connais la composition du tampon qu'utlise Roche, tu peux toujours en refaire toi même temps que tu respecte les doses et le pH, y'a pas de raison que celà ne fonctionne pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] marquage à la digoxigènine

Tampon 1. High SDS buffer avec. 7% SDS. 50% formamide deionized. 5x SSC. 2% Blocking Reagent. 0,1% (w/v) N-lauroylsarcosine. 50mM Sodium phosphate, pH 7.0.  [...] Tampon 2. Standard buffer + Formamide avec. 50% formamide deionized. 5x SSC. 2% Blocking Reagent. 0,1% (w/v) N-lauroylsarcosine. 0,02% SDS.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon d'extraction

Concernant le volume.. supposons que je veuille préparer 100ml de tampon. ça implique la préparation de l'EDTA à 50mM (ça, je sais faire. théoriquement), le problème c'est le volume du SDS à 2%, j'ai pensé à la règle C1V1=C2V2 mais je bute à chaque foi.  [...] Pas forcément pour le seul buffer de lyse d'ADN. On trouve du SDS dans les tampons pour l'analyse de l'ADN mais aussi pour l'analyse des protéines. Ca va être coton de faire un gel de polyacrylamide en pesant le SDS.  [...]

[Biologie Moléculaire] Taq DNA polymerase et Go taq DNA polymerase

Je ne connaissait pas mais en effet, le green Gotaq buffer contient, en plus des éléments nécessaires à la Taq polymérase (hormis les primers et dNTP), un tampon de chargement qui permet un dépôt direct sur gel.  [...] dans ce cas, si on utilise le kit go taq et le tampon vert, ce n'est pas la peine d'utiliser ni le PCR buffer ni le Tampon de chargement.  [...]

Immunohistochimie

- Pour démasquer l'antigène. immerger la lame dans du tampon Tris-EDTA buffer, pH 9.0, 0.05% Tween- 20*, et incuber à 95°C dans un bain-marie pendant 30 minut es. (Sinon adapter à votre protocole interne en gardant le pH requis).  [...] - Appliquer sur le tissu l'anticorps primaire dilué dans du tampon Tris-Hcl 0,05 M (pH 7,6) avec 0,05 % de Tween- 20 selon une dilution comprise entre 1/100 et 1/200 pendant 1 heure en chambre humide.  [...]

pb dépots echantillons d'ARN

Après avoir réaliser une extraction d'ARN de bacteries issue de l'eau avec un kit QIAGEN, je dépose mes échantillons avec du bleu de dépot pour ARN et là se produit une chose pas courante. Au lieu de que mon échantillon se retrouve au fond de mon puit (gel 2,5% agarose et tampon TE 1X tout a fait normal), celui ci se voit revenir à la surface et se dissipe dd'un coup dans mon gel.  [...] - Mélanger x ml de tampon TE 1x avec x ml de lysozyme à 10mg/ml (à -20°C) dans une tube Eppendorf biopur de 1,5 ml afin d'obtenir une solution à 5mg/ml de lysozyme.  [...]

[Microbiologie] digestion de plasmide

H buffer est le buffer pour l'enzyme promega. Pour la même enzyme chez NEB ce sera n'importe quel tampon (NEB1 à 4). Chez fermentas, c'est le orange buffer. Chez Roche se sera le buffer A... Il va sans dire que tous ces buffers sont différents. La bonne pratique recommande d'utiliser le buffer correspondant à l'enzyme du fournisseur.  [...] Pas faux piwi. Maintenant comme tu l'as dit, le buffer est spécifique de firme alors je sais pas si c'est une meilleure idée de le faire soi-même. En pratique, l'enzyme est normalement la même, donc le tampon devrait l'être aussi. Je crois qu'il est possible de trouver un tableau de comparaison entre les buffers des différentes firmes (sur biolabs je crois).  [...]

Sds-page

Je me demande si le SDS à un rôle différent selon sa concentration, ou son utilisation (en tampon ou en gel). Est -il possible qu'en plus de charger négativement les protéines, il les dénature plus ou moins suivant ces critères.  [...] Oui je sais, on peut aussi utiliser du DTT qui est non hépatotoxique et inodore pour les dénaturer. Mais je me demande pourquoi on utilise du SDS dans le tampon ET dans les gels. Ne pourions nous pas mettre du SDS en plus forte concentration dans le tampon et attribuer la charge du gel de concentration et du gel de migration simplement avec des solutions de Lower buffer et Upper buffer sans SDS (Trizma base + Acide chlorhydrique pour ajuster le pH souhaité).  [...]

[Biologie Moléculaire] Préparation des PCR à l'avance?

Je dois cribler une banque de mutants en utilisant la pcr (un primer dans la region constante de mon tag et le second dans la partie variable et il y a 48 tags différents). Ayant plusieurs milliers de pcr à faire je souhaiterais préparer à l'avance mon mix (taq, dntp, eau, buffer et un primer commun à toutes les réactions) et le dispatcher en plaque 96 puits pour ajouter au dernier moment uniquement l'ADN et le second primer.  [...] Que pensez vous des taq master mix commercialisées qui se conservent à temperature ambiante et contiennent la taq, le buffer, les dntp et parfois même le tampon de dépot.  [...]