• Forum - ADN, ARN, Puits

adn et arn

formule qui permet à partir de la densité optique de trouver la quantité d adn ou d arn dans un tube. merci de me donner une idee que je vais suivre.  [...] - le coefficient reliant les deux (1 Unité d'absorbance = x g d'ADN/l).  [...]

[Biologie Moléculaire] le gel idéal??

Ensuite, pour visualiser des ARN, il faut en mettre une quantité relativement importante et troisièmement, si tu voyais des ARN en bas, tu en verais aussi en haut qui représenteraient les ARN 18s par exemple. Or ici on ne voit qu'une faible bande en haut et un petit paté en bas qui selon moi n'est rien autre que des ADN un peu degradé, d'ailleurs, on peut voir un léger smear sur ton gel.  [...] Mon conseil, fait un gel 0,8 % agarose, grands puits, mets 10 uL d'ADN et laisse bien migrer. Révèlé au BET et si il y a bande aux UV, cela veut dire qu'il y a ADN (ou ARN même si bon...j'ai déjà expliqué.). Si tu ne vois rien, il n'y a pas d'ADN, si il y a un smear, il y a des ADN mais tout dégradés.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification d'ARN

Je suis en première année de thèse et après mon extraction d'ARN, j'ai une concentration de 8 ng/µL environ, dans un volume final de 11 µL (kit PicoPure de chez Arcturus, après microdissection). Je voudrais amplifier mes ARN car je dois étudier une dizaine de gènes en PCR temps réel, donc je n'aurai pas assez de matériel de départ (car il faut environ 50 ng d'ADN par puits...).  [...] Connaissez-vous un kit moins cher (il exsite aussi RiboAmp de chez Arcturus, mais assez cher aussi...).   [...]

[Biologie Moléculaire] qPCR

Si on veut amplifier d'une part de l'ADN et d'autre part de l'ARN, serait-il envisageable de n'utiliser qu'une seule plaque PCR. de faire l'étape de rétro transcription sur la plaque entière (avec la rétro-transcriptase seulement dans les puits avec ARN) et ensuite faire l'étape d'amplification sur la totalité de la plaque.  [...] Oui c'est possible, Applied Biosystem (entre autre) vend un kit qui permet de faire la RT et la qPCR dans la foulee. Par contre melanger sur une plaque de l'ADN et de l'ARN ca c'est pas terrible... tu risques d'avoir des contaminations ADN a la pelle.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN et contaminants

Je voudrais savoir si les grosses patates sans trainées que l'on voit sur gel d'agarose après extracton d'ARN sont de l'ADN génomique, de l'ARN dégradés ou de l'ARN avec des stucture secondaire. Merci à vous.  [...] donc à priori ces grosses bandes près des puits seraient de l'ADN Sinon j'ai un doute mais lorsque l'on mesure la DO à 260, on détecte ADN et ARN en même temps donc même en ayant un bon rapport (près de 1.8) ça ne signifie pas qu'il n'y pas de contaminant ADN Ce rapport permet de dire juste s'il y a ou non des protéines. C'est bien ça merci.  [...]

[Biologie Moléculaire] Aide sur la qPCR

Moi quand j'ai fait de la PCR en temps réel en M2 on partait de 1 µg d'ARN pour faire la transcription inverse. C'est largement suffisant vu que tu n'as besoin que de quelques ng d'ADNc pour la PCR.  [...] Je fais mes RT avec 1µg d'ARN que je reprends dans 200µl finaux. Dans chacun de mes puits de PCR je mets 2,5µl de RT soit 12,5ng d'ADNc.  [...]

[Biologie Moléculaire] électrophorèse en champ pulsé

Au niveau des puits si tu vois de la fluo (quel type de coloration utilise tu ) ca dois correspondre a de l'ADN maintenant est ce que la migration ne s'est pas bien passée Est tu sur be bien avoir orienté ton Gel As tu chargé assez d'ADN.  [...] je ne sais pas est ce que c'est probléme d'enzyme condition d'incubation ou pas bien mélanger ou il n y a pas d'ADN déjà (plugs mal préparé) vraiment j'ai peur que ca soit question d'ADN a votre avis la fluorescance qui est dans les puits ca correspond a quoi et pkoi a votre avis il n y a pas de migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] les ARNs et extraction

En fait dans les premiers puits en haut on a mis 1ug d'ARN après dilution (on le calcule a partir de la DO) et dans les puits d'en bas sont les mêmes échantillons avec 1µL de solution d'ARN (ça doit faire à peu près 10 µg). Il y a plusieurs puits car plusieurs dépôts on été fait à partir de plusieurs extraction (test de la répétabilité de la méthode).  [...] par contre l'histoire du smeaur est étonnante je ne dirais pas que l'ARN soit hors gel mais totalement dégradé (c'est vrai que c'est étonnant qu'il y ai un smear dans le haut du gel avec un quantité moindre). En fait pour moi ce qui est en rouge devrait être l'emplacemenent du 28 et 18S et en vert et bleu l'ARN dégradé das autres puits.  [...]

[Biologie Moléculaire] élèctrophorèse (ADN)

Donc, si tu n'observes pas de bande dans un puits c'est que le poids moléculaire de l'ADN fragmenté n'est pas dans la fourchette de taille observable par le gel d'agarose calibré (autrement dit, ton ADN est tellement petit qu'il a pu passer a travers ce maille et que lors de la migration, il a carrément quitter le gel en migrant vers une électrode).  [...] Les fragments d'ADN ne restent pas sur le gel d'agarose d'où le fait que tu n'as pas plusieurs barre (sinon ça voudrait dire que les délétions dù aux UV donne des molécules d'ADN de tailles différentes) mais bien qu'une seul qui correspond à ton ADN qui est resté intacte (n'oublie pas que tu n'as pas qu'une seule molécule d'ADN dans un puit mais plusieurs).  [...]

[Biochimie] cDNA - regulation des genes

''Chacun de ces cercles est un CDNA qui est fixée au fond du puits, on réalise un hybridation dont la couleur va être proportionnelle a la quantité des ARNm ds la cellule qui ns intéresse.  [...] et si ces cDNA son des bouts d'ADN, dans l'expérience ils sont identiques dans les puits et je ne comprends pas non plus le passage des ARNm et quantité d'ADN.  [...]