• Forum - Acétone, Froid, Extraction, ARN

[Biochimie] L'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN

après avoir cherché à plusieurs reprises sur internet, je n'ai pas réussi à trouver le rôle de l'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN.  [...] Si mes souvenirs sont bons, une fois qu'on a une interface claire après les lavages au phénol, on met de l'acétone avec notre solution d'ARN, on la laisse au froid toute la nuit puis on centrifuge longtemps à forte vitesse pour précipiter l'ARN. On obtient alors un culot qui ne contient que l'ARN q'on sèche alors par 1 ou 2 lavages à l'éthanol.  [...]

[Biochimie] extraction ADN et ARN

J'aimerais avoir les rôles du tampon citrate-sel, le rôle de l'alcool à 95° sur l'ADN, le rôle du réactif de Dische, le rôle du TCA, de l'acétone, de l'orcétone (quelle différence entre l'orcétone acide et l'orcétone alcoolique) pour l'extraction de l'ARN.  [...] Pour l'éthanol, tout dépend de la technique d'extraction que tu utilises, si tu utilises des colonnes, ça améliore la fixation de l'ARN à la colonne (et sa sélectivité), j'imagine que c'est pareil pour l'ADN.  [...]

[Biochimie] Western blot sur Fractions polysomales

Pour chaque fractions, j'extrais soit les ARN totaux soit les protéines. L'extraction des ARN totaux se passent très bien malgré la présence de sucrose, mais l'extraction des protéines ne me donne pas de résultats satisfaisants.  [...] J'ai utilisé différentes méthodes. une extraction au méthanol mais ma révélation d'anticorps n'est vraiment pas jolie du tout, j'ai essayé une extraction au phénol/chlo,même résultat. Je suis passé à une extraction au TCA avec lavage à l'acétone et ici, ma membrane est moins sale, mais mes bandes ne sont pas encore satisfaisantes.  [...]

[biochimie] concentration chlorophylle

Je vais réaliser des extraction de chlorophylle avec du diméthylformamide, mais je ne connais pas la formule pour déterminer les concentrations, je sais qu'elle est un peu différente de celle pour l'extraction à l'acétone. Quelqu'un connait il cette formule.  [...]

Solubilité d'ADN et d'ARN

L'ADN et l'ARN ne SONT PAS SOLUBLES dans le phénol, le chloroforme, l'ethanol, l'acétone, l'isopropanol etc... C'est d'ailleurs bien pratique quand on veut les extraire et les purifier.  [...] L'ARN ET l'ADN précipitent lorsque la concentration en ethanol augmente.  [...]

[Microbiologie] [méthodologie] Recherche sur les prélèvement et mise en évidence des spores

To determine the microbial ATP level selective extraction is used. First, non-microbial ATP is extracted with a non-ionic detergent (Triton X-100) and then destroyed by treating with a high level of (typically) potato ATPase for 5 minutes. Subsequently the microbial ATP is extracted using either trichloroacetic acid (5%), an organic solvent (ethanol, acetone or chloroform) which will require subsequent dilution to avoid luciferase inhibition or cationic detergents.  [...] Les spores car ce sont les organisme les plus résistants et donc qui resiste au détergent, lors du néttoyage du sol on sait que les Bactérie, cellules, Protozoaire, amibes et autre sont détruite, mais pas les spores d'où cette recherche de contamination pas les spores, pour pouvoir stoppé la production et mettre fin a la contamination par des technique plus puissante, tout en enlevent le matériel qui risquerai d etre endommagé.   [...]

Colorant hydrophile/hydrophobe

pareil pour la chlorophylle, vous savez ou on peut en avoir j'ai pensé a en extraire moi même mais je n'ai plus accès à de centri pendant les vacances, donc p as de centri... pas d'extraction.  [...] Certes mais ne serait-ce pas un brin plus... chiant de purifier la chlorophylle de son acétone (solvant d'extraction) afin que la manipulation soit d'autant moins risquée pour de jeunes ou très jeunes enfants.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème avec gel d'acrylamide avec urée

L'expérience que je fais est la fixation d'ARN sur des billes de streptavidin-agarose. J'incube les billes avec des extraits nucléaires, je lave et j'élue les protéines avec un mélange d'acide acétique glacial 66% et 33mM MgCl2. Je pr écipite ensuite les protéines dans l'acétone (5 volumes) en pr ésence de glycogène.  [...] Comme vous le voyez, il y a un énorme problème de migration pour les pistes 2 et 3, alors qu'il n'y a aucun problème pour l'extrait nucléaire repris dans du laemmli... J'en déduit que le problème ne vient pas de la migration ni du gel.   [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

1) J'ai des ARNs que je voudrait nettoyer. La DO 260/280 est bonne (. 2) mais je suis apparemment contaminé par les sels du tampon RLT (extraction sur colonne) puisque ma DO 260/230 n'est que de 1,3. Est-ce que vous pensez que ça peut poser un problème pour les envoyer en Q-RT-PCR Et si oui, pour éliminer ces sels, est-ce qu'une simple pr écipitation à l'isopropanol (+lavages à l'EtOH) suffirait.  [...] Sinon tu peux les repasser sur ta colonne d'extraction, par contre, tu risques de perdre au niveau rendement d'ARN alors tout dépend de ta concentration. Si tu pr écipites à l'isopropanol, tu risques également de perdre de l'ARN mais si il t'en reste suffisamment pour réaliser une RT PCR ça devrait aller.  [...]