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Définition | Western blot - Immunoblot | Futura Santé

Image d'une membrane de western blot. Les bandes foncées correspondent aux protéines qui ont interagi avec les anticorps marqués utilisés. JWSchmidt, Wikimedia Commons, cc by sa 3.0.  [...] Un western blot, ou immunoblot, est une méthode de biologie moléculaire qui permet la détection de protéines spécifiques sur une membrane.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique Laurière et Western Blot

Je suis actuellement entrain de tester la technique de Laurière en Western Blot, pour transférer des protéines d'un gel de polyacrylamide sur une membrane de nitrocellulose.  [...] Vous pouvez également pousser le temps et le courant au maximum pour avoir la totalité de vos grosses protéines et faire sortir complètement vos petites protéines et rajouter une seconde membrane derrière la première pour faire un western sur les deux en parallèle.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transfert d'ADN

Pourquoi ne peut on pas transferer l'ADN sur une membrane de nitrocellulose avec du courant(même principe que pour les protéines)(western).  [...] Quelle sont les meilleures façons de transferer l'ADN sur une membrane (A part le southern).  [...]

[Biologie Moléculaire] Expliquer le Blocking buffer

en immunohisto, je ne sais pas. Par contre, en western blot, on utilise un blocking buffer pour saturer la membrane. Ce buffer est souvent du lait ou de la BSA ou une sauce commerciale... Le principe est qu'il contient des protéines. Les anticorps étant eux même des protéines, ils pourraient se fixer non spécifiquement sur la membrane et faire du bruit de fond lors de la révélation.  [...] En saturant la membrane avec des protéines non spécifiques, il y a moins d'AC qui va s'y fixer car les interactions protéine/membrane non spécifiques doivent être plus fréquentes que les interactions protéine/protéine non spécifiques.  [...]

[Biochimie] Dot Blot et Northern Blot

Le dot blot c'est un peu l'ancêtre du western blot. On dépose les protéines sur une membrane, ça fait une tache (le dot) et on révèle grâce à des anticorps.  [...] A part la membrane, il n'y a finalement aucune similitude. La question que je ne m'étais jamais posé c'est est ce que l'on a fait des dot blot avec autre chose que des protéines (Je n'ai jamais pratiqué ou vu que cette application).  [...]

Méthode ELISPOT !

. Quand je fait le lavage de cellules,,,,, les cellules qui sont attaché au ligands sont relargé est les liaisons sont cassé,, et en faite ce qui reste sur ma boite serais des ligands avec les protéines secréte par ces cellules,,, dans ce cas,, je pourais voir si muc1 était impliqué ou pas,, en utlisant des Anticorps,,,,  [...] pour la chromato, je pensais à fixer muc1 sur des billes de sépharose et incuber avec du lysat cellulaire. Ensuite, tu passes l'éluat sur western. Tu peux colorer la membrane au rouge ponceau pour avoir une idée de la taille des protéines récupérées puis, en fonction des différentes possbilités, tester les anticorps.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot / proteine hrp

Et cela en faisant bien sur un western sans sds afin de ne pas dénaturer les proteines pour pouvoir révéler la peroxydase sur la membrane.  [...] Je voudrais faire la même manip que toi. Quelle est la composition de ton tampon de transfert Tu as transféré tes protéines sur membrane avec le système Biorad.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dot blot

J'ajouterai que les échantillons contenant du SDS sont plus difficiles à caractériser en dot-blot de part leur dispersion sur la membrane, due à des phénomènes de tension de surface.  [...] Je dis que ce n'est pas aussi rigoureux qu'un western parce que les protéines ne sont pas solidement ancrées dans la membrane et si un jour tu as l'occasion de faire un western et un dot-blot en parallèle hybridés avec le même anticorps tu pourrais avoir des surprises comme cela m'est arrivé.  [...]

différence entre western blot et immunoblot

Un western blot est un cas particulier d'immunoblot. Un immunoblot est une technique avec laquelle tu détectes des molécules immobilisées sur une membrane avec des anticorps. Un western blot est un immunoblot dans lequel tu détectes des protéines séparées par électrophorèse.  [...] Enfin, je précise également, qu'il est possible de réaliser des Dot-Blot avec des protéines, mais également avec de l'ADN et/ou de l'ARN (il y a juste la membrane qui change.).  [...]

[Biochimie] Différence western blot / immunoprécipitation

Ce sont deux techniques qui n'ont absolument rien à voir. Le Western Blot consiste à révéler la présence d'une protéine sur une membrane grâce à des anticorp, tandis que l'immunoprécipitation consiste à isoler une protéine -éventuellement en complex avec d'autres protéines/RNA/ADN - à partir d'un lysat.  [...] Du coup cette raison me semble valable et j'y avais pensé, c'est mieux d'avoir la seule protéine sur la membrane plutôt que toutes les autres avec, même si l'anticorps n'est censé révéler que la protéine d'intérêt.  [...]