• Santé - Western, Extrait, IP

[Biochimie] analyse résultat d'IP

Je ne comprends pas dans les figures B et C (respectivement immunoprécipitation et pulldown) à quoi correspond les colonnes 1/10 input Dilution au 1/10e mais de quoi Pourquoi les bandes sont plus épaisses.   [...] Input, c'est le western effectué sur l'extrait avant IP. Il contient donc toutes les protéines et sert a vérifier que dans ton extrait, la protéine dont tu étudies l'interaction avec ta cible de précipitation est bien présente.  [...]

Interaction cellule/virus

J'aimerais verifier l'interation d'une glycoprotéine virale avec une protéine cellulaire. Pour cela j'incube le virus et la cellule, et je veux faire une IP suivit d'un western blot.  [...] Il existe un anticorps contre la glycoprotéine, mais on le sait deja que cette glycoprotéine est impliquée dans la fusion. Moi je m'interesse à l'interaction glycoprotéine/recpteur, et la fonction de cette interaction. Il me faudrait un anticorps contre le recepteur cellulaire, mais il n'existe pas.   [...]

[Biochimie] bandes parasites aprés révélation western-blot

j'aimerais savoir si quelqu'un à l'habitude de réaliser des immunoprécipitations avec révélation de la protéine d'intérêt en western blot.  [...] mon éluat final d'IP contient l'Ac que j'ai utilisé pour réaliser mon IP et bien sur ma protéine d'intérêt, je réalise ensuite un SDSpage et un western sur la nuit, je révèle mon blot à l'aide de l'Ac que j'ai utilisé pour mon IP ainsi qu'avec un Ac-HRP dirigé contre mon Ac d'IP, je bloque la membrane avec lait écrémé 3%.  [...]

[Biologie Moléculaire] Lecture Sequence ADN et WB

- Troisième question. l'IP vous dit quelle protéine on a immunoprécipité (ici DCC est immunoprécipitée), et WB vous dit quelle protéine a été marquée en western blot (ici p-y kinase). On utilise un anticorps polyclonal pour les immunoprécipitations et pour le western blot, si on détecte une autre protéine que celle immunoprécipitée, on utilise soit un monoclonal soit un polyclonal.  [...] Merci d'avoir répondu c'est plus clair pour les 2 premieres cependant pour la question sur le Western Blot ce que je n'arrive pas à comprendre les indications de l'experience et donc comment peut on avoir une bande caracteristique pour cet exemple et déduire par exemple qu'un produit X qu'on a rajouter induit la Phosporylation de DCC(recepteur)(en comparaison des intensités des bandes par ex).  [...]

[Biologie Moléculaire] augmentation du taux d'ARN mais non celui de la protéine

Ta protéine est une protéine nucléaire Est tu certaine de bien libérer toutes les protéines dans ton extrait protéique En particulier vas tu assez loin dans la concentration en KCl Si cela se trouve ta protéine reste fixée sur l'ADN.  [...] Le lysat c'est ton extrait expérimental ou ton contrôle. Parce que si c'est ton extrait expérimental elle n'est peut être simplement pas assez concentrée dans ton extrait. Du coup dans ce cas là, le plus simple dans un premier temps serait de faire un extrait nucléaire et un passage en centricon/microcon (rien de vulgaire) pour concentrer ton matériel et en mettre 3 caisses.  [...]

[Biochimie] Extraction protéine de cerveau pour IP

je souhaiterai faire une IP d'une protéine en fusion avec MBP et des extraits protéiques de cerveau de souris.  [...] Les IP seront ensuite soient passées sur gel, spectro de masse et/ou western/blot.  [...]

[Immunologie] immunoprécipitation

L'immunoprécipitation est une technique biochimique permettant de mettre en évidence une intéraction physique entre 2 protéines. On effectue d'abord une IP avec une résine permettant de purifier uniquement une protéine et ensuite on révèle par western la seconde protéine qui, si elle est présente, démontre bien que les 2 protéines étaient liées car l'IP ne sélectionne que la première protéine ou la première protéine plus celles qui sont liées à elles de manière covalente.  [...] donc si on retrouve une autre protéine par western c'est qu'elle était accrochée avec la première protéine qui a été retenue sur la colonne.  [...]

[Biologie Cellulaire] Je comprends rien!!

coucou le monde...j'ai le concours dans un mois de biocell, et je comprends toujours rien...comment il faut reflechir en biocell avec les IP, western blot...est-ce que vous pouvez voir ce lien...et m'aider comment reflechir j'en ai troooo besoin.  [...] euh pour faire court et sans vouloir te vexer je pense que personne te répondra. On a tous surement plein de chose a faire et si la question ou les questions ne sont pas claires nettes et précises on va pas s'emmerder à télécharger chépakoi, refaire tout un TD et te l'expliquer en entier. Pour ça il faudrait 1 heure voir plus.   [...]

[Biologie Cellulaire] Manip de co-IP??? what's wrong!!!

Je pense que ta première explication est la bonne. Tu dois trainer de la chromatine insoluble que tu retrouves dans tes culots d'IP. Fais un préclearing de ton extrait (centrifugation à fond pendant au moins 15 minutes) avant d'incuber avec ton anticorps et tes billes.  [...] C'est exactement ce qui arrive quand ton Ac secondaire (voire primaire mais c'est moins probable) de western blot reconnait ton Ac d'IP (antiV5). Lors de ton IP tu sature en antiV5, certains seront fixe a V5 d'autres seront libres. Lors de l'elution tu recuperes ta proteine V5, toutes celles qui sont accrochees avec ET ton antiV5 que tu fais migrer sur gel.  [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction protéique pour western blot

Même si mon protocole est peut être trop long, il est néanmoins complet, et peut être fait en une 1/2 journée. Au moins, il pourra comprendre toutes les étapes, savoir ce qu'il y a dans le tampon, savoir combien il mets de protéines pour son gel... Bien sûr que c'est pas primordial pour juste vérifier si ta prot est bien là dans ton extrait, mais bon, j'imagine que si sa manip marche, il va devoir en faire d'autres, avec peut-être plusieurs boites, donc il faudra mettre une quantité équivalente pour chaque puits.  [...] Ce protocole est un protocole d'IP. On utilise pas un RIPA pour faire un extrait cellulaire total parce que c'est absurde (sauf à la limite si l'on veut doser). Un RIPA permet de faire des IP (principallement). Tu utilises certainement ce protocolle en routine mais ne t'imagine pas qu'il peut être décliné à toutes les sauces, y comprit pour les manipes simples.  [...]