• Santé - Western, Detection, Protéines

[Biotechnologie] techniques de détection

Dans mon cours j'ai étudié divers outils moléculaires de détection comme le southern et northern blots, random priming, etc etc, et j'aimerais savoir quand utiliser quel outil.  [...] Le Western Blot permet la détection de protéines spécifiques.  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

L'immunoblot ou Western blot est une méthode qui permet la détection et l'identification de protéines spécifiques dans un échantillon biologique.  [...] Exemple d'applications ben comme dans le sujet que j'ai mis en lien ^^ (pour détecter des protéines ubiquitines, c'est à dire des protéines qui marquent les protéines à éliminer, éliminés par les protéasomes situés dans les noyaux et cytosoles des cellules d'ailleurs).  [...]

Définition | Western blot - Immunoblot | Futura Santé

Un western blot, ou immunoblot, est une méthode de biologie moléculaire qui permet la détection de protéines spécifiques sur une membrane.  [...] Les western blots sont largement utilisés dans les laboratoires de recherche qui s'intéressent aux rôles des protéines. Dans le domaine médical, elles sont utilisées dans le diagnostic de certaines maladies. Les tests VIH de confirmation utilisent cette technologie pour détecter un anticorps anti-VIH dans un échantillon de sérum.  [...]

Détection de protéines mal repliées par western blot?

Si ce n'est que pour une protéine, cela doit être possible de voir un changement de taille de la protéine en condition non dénaturante. Une protéine mal replié étant généralement plus grande que celle bien replié, elle migrera moins vite. Mais l'insuline est vraiment petit en taille, et je ne sais pas s'il est possible de voir clairement un tel changement de conformation.  [...] Si votre objectif est ensuite de regarder toute les protéines (donc le protéome), le DIGE -2D (2 dimensional difference gel electrophoresis) est probablement la technique la plus adapté (toujours en condition non dénaturante).  [...]

Questionnement scientifique sur VIH

Le patient est en periode de seroconversion. On détecte p24 en premier et les autres anticorps arrivent plus tard. Ceci justifie un controle serologique 1 mois plus tard et un nouveau western blot (élimine aussi le risque d'une réaction aspécifique).  [...] Il existe deux formes de VIH la forme 1 et la forme 2. VIH-2 exprime une p26 proche de p24. En revanche il n'exprime pas gp120. Donc on peut avoir une réaction croisée avec p26 au moment de la détection de p24. Pour éliminer ceci on fait un western blot pour chercher les protéines de VIH-2.  [...]

[Biochimie] qPCR :

Sachant que je sais que cette proteine est exprimée dans l'organe d'où j'ai extrait l'ARN, et que mon ARN (et mon ADNc) est de bonne qualité, je ne comprends pas pourquoi au bout de la 3eme paire de primers designées j'arrive toujours pas a amplifier mon gene d'interet.  [...] Si tu as accès à ce type de matériel, il pourrait être intéressant d'essayer un western blot sur tes cellules (détection de la protéine) ou un northern blot (détection des ARN).  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Je cherche le moyen d'optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire. Je travaille sur FAS (274kDa) et je n'arrive pas à la transférer.  [...] Bonjour a tous. Je suis de retour et là, je suis vraiment désespérée (car j'ai tout tenté). J ai fais un dot blot comme tu me l'avais conseillé, et j arrive à détecter ma protéine (le signal est très faible, voir inexistant pour certains échantillons, mais c'est normal.  [...]

Production de Protéines recombinantes

Je suis capable de détecter ces copies surnuméraires en QPCR, les protéines par western-blot mais aucune trace quand je tente un dosage par Elisa.  [...] Autre précision, à cette étape je n'ai pas eu de retour du fournisseur quant à la nature poly ou monoclonal de l'anticorps utilisé dans les kits Elisa.   [...]

[Biochimie] western surnageant culture

je souhaiterais avoir des renseignements afin de détecter par western blot une protéine contenue dans le milieu de culture de cellules. Faut-il concentrer (précipitation, ultracentri, chromato,...) les protéines présentes dans le surnageant de la culture Comment procéder.  [...] Sinon sur ce forum, Gorben parle souvent d'une précipitation au TCA qui permet de concentrer les protéines. Ca devrait aussi pouvoir vous intéresser.  [...]

[Biochimie] Différence western blot / immunoprécipitation

Ce sont deux techniques qui n'ont absolument rien à voir. Le Western Blot consiste à révéler la présence d'une protéine sur une membrane grâce à des anticorp, tandis que l'immunoprécipitation consiste à isoler une protéine -éventuellement en complex avec d'autres protéines/RNA/ADN - à partir d'un lysat.  [...] Certes, on réalise parfois un Western Blot après une IP, mais ça n'est pas le corps de l'expérience. On peut faire plein d'autres choses après une IP. récupérer l'ARN lié par la protéine - on parle alors de RNA ImmunoPrécipitation ou l'ADN - et on parle alors de Chromatin ImmunoPrecipitation. par exemple.  [...]