• Santé - Western, Cellules, Origine

[Biologie Moléculaire] Protocole

Salut tout le monde, quelqu'un aurait l'amabilité de me renseigner sur le protocole western blot effet de l'ethniylesradiol sur les cellules ovariennes origine, protocole et enticorps utilisés.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Les cellules sont remises en suspension dans le tampon de lyse pour western blot (cf. annexe 2) à la concentration de 50.10 6 cellules /ml. Elles sont soniquées 6 fois 5 secondes, en prenant garde de bien refroidir les tubes entre chaque passage. Tous les échantillons sont dilués au tiers par une solution échantillon (cf.  [...] Les molécules originales sont insolubles dans l'eau, dans le tampon (Hanks'HEPES) utilisé pour l'incubation des cellules et dans les solvants organiques compatibles avec une non toxicité vis à vis des monocytes, lymphocytes. Les composés sont tout d'abord dissout dans une substance solubilisante.  [...]

[Biologie Cellulaire] ultracentrifugation et cellules!

je voudrais réaliser des ultracentrifugations différentielles afin de déterminer la localisation d'une protéine spécifique qui m'intéresse. mais au lieu de le faire sur tissu, j'aimerais le faire à partir de culture de HEK. Auriez vous une idée du nombre de cellules dont j'ai besoin pour avoir au final une quantité de proteine suffisante pour faire des western.  [...] Tout dépend du compartiment cellulaire que tu veux isoler, de la représentation de ta protéine dans ce compartiment...Donc c'est par l'expérience que tu sauras quelle quantité de cellule te permet d'avoir une bande convenable en western. Pour commencer tu peux essayer plusieurs conditions où tu auras mis un nombre croissant de cellules.  [...]

[Biologie Moléculaire] Disparition inexplicable

Cela devient plus problématique quand je fais des western sur les cellules issues d'animaux ayant perdu l'expression de la fluorescence sanguine. Les résultats sont alors difficilement interprétables je me retrouve avec plusieurs bandes en western. Comme si le GFP était dégradé de façon différentielle, l'anticorps ne reconnaissant qu'une plus petite partie.  [...] Le problème du western, c'est que les cellules de souris qui n'expriment plus de fluorescence sanguine ne donnent pas une protéine au poids attendu. Il est plus bas et je me retrouve avec plusieurs bandes, comme si je disposais de plusieurs isoformes de la protéine transgénique mais avec un portion GFP de taille variable.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cycle cellulaire

a). En traitant les données, tu as accés au % des cellules dans les phases du cycle cellulaire. Tu peux alors conclure sur l'activité de ta molécule (antimitotique avec blocage en G2/M) puis orienter la suite de ton étude en foction de ça (microtubules ou cycline etc).  [...] Au niveau des manipulations tu peux réaliser un western blot à partir de tes différentes cellules lysées ciblant certaines protéines spécifiques du cycle cellulaire.  [...]

[Biochimie] tampon de lyse

juste une petite question, je travaille sur des cellules 293-t et lorsque je lyse certaines protéines restent insolubles, quelqu'un aurait-il une idée pour un tampon amélioré qui me permettrait de solubiliser ces protéines en vu du western.  [...] je cherche à quantifier l'expression d'un récepteur membranaire (cd28) par western après transfection des cellules 293t, dans le but de valider des essais d'interaction prot/recep.  [...]

[Biologie Moléculaire] mutagènese, transformation, transfection

sachant que l'objectif du travail est de transfécter des cellules eucaryotes par un vecteur d'expression pour étudier les fonction d'une protéine par western et immunofluorescence.  [...] Tu as 2 transformations distinctes en fait. Une première, avec les bactéries, qui te sert à amplifier le plasmide et réaliser la mutagenèse dirigée. Ensuite, tu récupère ton bluescript et tu transfert dans le vecteur POZ. Ensuite, tu transformes des cellules eucaryotes avec le vecteur POZ.  [...]

Un moustique OGM pour stopper l'avancée du paludisme ?

Des chercheurs de la Case Western University (Ohio), en collaboration avec leurs homologues allemands, sont parvenus à modifier génétiquement des moustiques dans le but d'intervenir dans le cycle de vie du Plasmodium, le parasite à l'origine du paludisme.  [...] Celui-ci se développe dans l'intestin de l'insecte, puis s'échappe à travers la paroi pour entrer dans la glande salivaire du moustique, d'où il peut être transmis à de nouvelles personnes. Le gène modifié du moustique provoque la sécrétion d'une protéine qui couvre la paroi et bloque le passage du Plasmodium.   [...]

Recherche de références d'un anticorps anti FAS HUMAIN

Recherche de références d'un anticorps anti FAS HUMAIN.   [...] Je dois faire un western blot de la protéine FAS à partir d'échantillons provenant des cellules HepG2. Quelqu'un aurait-il des références d'anticorps qui marchent bien.  [...]

Actine/myosine

Besoin d'une réponse pour un TP de biologie moléculaire. Combien de sous unités protéiques rentrent dans la structure quaternaire de la protéine Actine/myosine.   [...] Je ne sais pas vraiment la question est posée ainsi ce sont des questions de reflexion suite a un TP de Western Blot sur des cellules musculaires de différents poissons.  [...]