• Santé - Western, Anticorps, Protéine

[Biologie Moléculaire] Comment savoir qu'un ARNm est entier ?

Dans un deuxième temps j'ai produit un anticorps reconnaissant cette protéine et j'ai fait un western avec l'anticorps purifié. J'observe alors une bande au bon poids et d'autres plus petites (ne fait pas une smire, il n'y a que 3 bandes de plus).  [...] Un anticorps en western blot donne rarement qu'une seule bande, sauf si l'on dépose la protéine recombinante. Donc qu'as-tu déposé, des extraits (de tumeurs, de cellules surexprimant ta protéine après transfection d'une construction la codant,...), la protéine recombinante.  [...]

[Immunologie] immunoprécipitation

Dans la co immuno, tu va piocher avec un 1er anticorps ta 1ere protéine que tu soupçonne d'interagir avec une 2eme protéine. Ensuite a partir de ce complexe Anticorps/protéine que tu as purifié tu va essayer de detecter la 2eme protéine par un Western blot.  [...] Si tu a apparition d'une bande sur ton Western avec l'anticorps anti 2eme protéine c'est qu'elle est présente en meme temps que protéine 1, si pas de bande c'est que non.  [...]

[Biochimie] Etude de la phosphorylation d'une protéine

En fait je pensais aussi faire un western sur ton gel avec des anticorps anti-Ser/Thr/Tyr phorsphorylées et anti- ta-protéine. Je n'ai jamais fait de 2D mais je sais que ça se fait. Et puis pour les grosses protéines ont peut aussi faire des gels d'agarose, au moins pour la première dimension.  [...] Heureusement cette protéine est couplée à l'EGFP, j'ai donc pu mettre au point une immunoprécipitation pour la séparer des autres protéines cellulaire sur SDS-PAGE. En parallèle je réalise un blot avec l'anticorps dirigé contre la protéine virale. Ensuite je découpe sur mon gel coloré au nitrate d'argent la bande immunoprécipitée correspondant à ma protéine.  [...]

Immunohisto

Cependant. 1) en western, si l'anticorps est suppose reconnaitre un site qui peut etre modifie (phosphoryle, clive, episse, acetyle, palmytoyle...), il se peut que en fonction du tissu, la proteine soit ou non modifiee a cet endroit et donc ne lie plus aussi bien l'anticorps en western-blot.  [...] Comment expliquer que mon anticorps (spécifique de l'état phosphorylé d'une protéine) se fixe sur le tissu cérébral dans une structure Y (donc il marche.), mais pas dans la structure X (y a rien du tout de marquer.) où l'on observe du marquage en western avec le même anticorps.  [...]

[Immunologie] Production d'anticorps polyclonaux

je souhaiterai faire produire des anticorps polyclonaux pour une manip de western blot contre une protéine membranaire de souris pour laquelle le seul anticorps existant n'est pas du tout spécifique.  [...] Est-ce que quelqu'un a déjà commandé des anticorps à la demande Et si oui pouvez-vous me donner une idée du prix (de la synthèse du peptide à la livraison de l'anticorps, purifié ou non, ou du serum) ainsi que le nom de la boite.  [...]

[Biochimie] Différence western blot / immunoprécipitation

Ce sont deux techniques qui n'ont absolument rien à voir. Le Western Blot consiste à révéler la présence d'une protéine sur une membrane grâce à des anticorp, tandis que l'immunoprécipitation consiste à isoler une protéine -éventuellement en complex avec d'autres protéines/RNA/ADN - à partir d'un lysat.  [...] Du coup cette raison me semble valable et j'y avais pensé, c'est mieux d'avoir la seule protéine sur la membrane plutôt que toutes les autres avec, même si l'anticorps n'est censé révéler que la protéine d'intérêt.  [...]

RT PCR et après ....

Le second probleme evetuel est la quantite de ton amteriel de depart. Si tu es parti d'ARN totaux, je te conseillerais de faire d'abord une purification des ARN polyA, ca enrichira la quantite de ton ARNm dans la popluation d'ARN.   [...] J'oubliais de dire, qu'une autre facon de tester l'expression de ton gene, est de verifier la presence de la proteine par western blot. en comparant cela avec les proteine d'une cellule non transfectee. Cela necessite, cependant, d'avoir des anticorps contre ta proteine, ou d'avoir ajouter un tag a ta proteine.  [...]

[Biochimie] anticorps ,

bonsoir tout le monde, je suis à la recherche d'un anticorps spécifique pour la globuline A3, pour détecter cette protéine par western blot, quelqu'un aurait déjà tester des anticorps pour ce type de globulines mon matériel végétale est le blé.  [...] je ne trouve pas de documentation aussi sur la famille des globuline chez blé, je sais qu'il y a deux groupes viciline 7S et légumine 11S.   [...]

[Immunologie] Production proteine recombinante et anticorps

Sinon, les sociétés qui commercialisent des anticorps fournissent aussi des protéines recombinantes (ça sert de contrôle en western blot par exemple). Je te garantis pas la qualité. j'ai déjà acheté un anticorps qui ne reconnaissait même pas la protéine recombinante fournie pas la même société.  [...] j'irais poser la question a eurogentec ( http.//www.eurogentec.com/eu-home.html ) pour ce qui est d'un anticorps c'est plusieurs mois le temps que l'animal developpe sa réponse immunologique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Co-immunoprecipitation

Comme le titre l'indique je souhaiterai réaliser une c-immunoprécipitation afin de montrer l'interaction de deux protéines in-vitro. N'ayant absolument jamais réaliser ce type d'expérience, je souhaiterai savoir si cela est compliqué Ensuite, j'ai une question technique.  [...] lors de la précipitation de notre protéine cible avec un anticorps, faut il auparavant fixer notre protéine avec les autres protéines qui interagissent avec (je me dis que sans cela les interactions sont peut être trop faible pour permettre de visualiser sur western blot).  [...]