• Santé - Volumes, Concentration, Culture générale

[Biologie Moléculaire] SOS-protocol d'extraction d'Adn

je suis etudiant en master et je bosse sur un sujet de recherche. typage des HPV qui cause le cancer du col de l'uteris et dans ce cadre j'utilise un kit de typage, ben jaimerais bien comparer ce kit avec l'extraction classique...pcr...hybridati on.   [...] NB- protocol professionel avec les volumes et concentration et non pas de la culture generale. et merci.  [...]

Culture cellulaire en 96 puits

Non, ce qui m'inquiete le plus, ce sont les comptages au Bleu de Trypan. je mets 30 microlitres de trypsine par puits, puis autant de milieu de culture lorsque les cellules se sont decollees. Mais alors je suis trop diluee pour faire un comptage correct. J'ai fait une tentative de centrifugation pour concentrer les cellules, mais dans de si petits volumes, je me demande si cela est bien raisonnable.  [...] J'ai déjà eu l'occasion de faire de la culture cellulaire, certes pas sur d'aussi petits volumes, mais chaque fois que je devais faire des comptages, je concentrais la trypsine pour n'avoir aucun souci en suite au niveau de la dilution du milieu cellulaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole pour une ligature + tranformation ?

Il est important pour la ligation de faire migrer cote à cote le plasmide et l'insert digérés (2µl par exemple) afin d'évaluer les concentrations de plasmide et d'insert.  [...] La ligation se fait dans de petits volumes, en principe 10µl. Dans le milieu de ligation il vous faut mettre le buffer de la ligase (en principe concentré 10X). De l'enzyme. Sa concentration peut varier mais en général en mettre 1µl est suffisant. Enfin il est très important de ne pas oublier de mettre de l'ATP.  [...]

[Biologie Cellulaire] gros besoin d'aide: toutes mes cellules C2C12 sont mortes!

Attention pour le lien que tu donnes, je trouve les volumes très importants par rapport à la taille des flasks. Je pense qu'il s'agit là de culture de cellules non adhérente, où les flasks sont cultivés en position verticale et où le volume de milieu est nettement plus important que la culture horizontale de cellules adhérentes.  [...] Déjà quand tu décongèles, il faut que tes cellules soient le plus concentrées possible de manière à optimiser leur reprise. Généralement, je décongèle une ampoule dans un T25. En plus l'ATCC ils sont assez radins et leurs ampoules ne comptent pas plus de 500000 cellules, raison de plus pour décongeler ce genre d'ampoule dans le plus petit conditionnement possible.  [...]

[Biotechnologie] proteine recombinante d'interet médical

ben j'ai pensé aux plantes transgéniques pour introduire le gene exprimant cette protéine dans un compartiment de la plante où naturellement elle n'est pas produite donc voila pour le système d'expression mais par contre je ne vois pas en quoi il nous donne les caractéristiques de cette protéine.   [...] Pourquoi Ils sont intégratifs, donc on a une expression à long terme, et comme tu es sur un système cellulaire, les dérives de l'intégration (cancérisation) ne sont qu'une menace financière (ça peut écrouler ton système mais pas de danger direct pour le traitement chez l'homme).   [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation ADN plasmidique insert

Concernant les volumes, ils ne sont pas calculables tant que tu n'as pas la concentration de tes ADN dans les solutions mère.  [...] Non, cela veut dire que la solution est 10x plus concentrée que ce que tu as besoin. Par exemple, si ton tampon doit avoir 150mM de sel, tu fais une solution à 1,5M. Cette solution sert en fait de solution stock (1L par ex). Il suffit alors de la diluer 10x pour avoir la solution finale (du coup avec 1L, tu as 10L).  [...]

[Biologie Moléculaire] Question purification QIAprep

Edit. J'ajouterai que c'est une manip un peu ancienne, et que souvent l'ADN est de mauvaise qualite... generalement on fait ca pour economiser un peu d'argent en faisant une miniprep au lieu d'une maxi prep. Si c'est l'argent ton probleme, tu peux faire une extraction phenol/chloroforme (jusqua la precipitation), puis echainer avec une miniprep pour bien purifier ton ADN.  [...] Cm ajouté dans la préculture comme tu m'as conseillé, Gorben, à DO = 1 et à DO = 1.5, puis j'ai laissé la nuit à 37°C avec agitation. Le matin extraction selon le protocole QIAgen, avec des volumes de culture différents. 20 ml et 10 ml, de chaque condition physiologique.  [...]

[Biochimie] Transfert western blot raté

Je souhaite induire une protéine à partir d'un système procaryote (en E.coli) grâce à l'IPTG. J'ai donc fait des tests d'inductions sur des petits volumes de culture (5ml). J'ai lysé mes bactéries puis déposé la fraction totale sur gel SDS-PAGE. Après coloration j'ai pu déterminer que ma protéine d'intérêt était induite (taille estimée 74 kDa).  [...] Sinon, la conductivité électrique methanol est meilleure que celle de l'ethanol. En général on préfère remplacer le methanol par de l'ethanol, mais pour les transferts, c'est pas forcément la meilleure idée. Ceci dit je ne pense pas que cela joue à ce point, et puisque vous avez déjà eu de bons résultats.  [...]

[Biologie Cellulaire] techniques de cultures en biocell

En laboratoire, en routine on utilise généralement les cultures en milieu liquide ou en milieu solide afin de faire des cultures permettant principalement d'obtenir une biomasse plus importante.  [...] Une fois le milieu identifié tu choisira le type de support la culture liquide permet à la bactérie de croître en 3 dimensions et donc dans un volume plus important ainsi que de se développer sans contacts directs avec ses voisines. Avec comme inconvénient d'être moins facilement manipulable et extractable. Elle peut s'adapter à de très grands volumes.  [...]

[Biologie Cellulaire] régulation de la concentration du milieu intracellulaire et extracellulaire

Parceque samanthaaa, la cellule peut exploser tout en ayant eu, avant son explosion, une concentration en ions égale à celle du milieu qui l'entoure...Je veux dire par là que deux milieux de concentrations égales n'ont pas forcément le même volume. ce qui veut dire que si la cellule souhaite garder un équilibre osmotique, ce n'est pas pour éviter de trop gonfler ou de trop dégonfler, parceque.  [...] Juste pour info une cellule n'explose pas sans raison si sa concentration en ions est égale à celle du milieu extérieur. Bien évidement les volumes ne sont pas les mêmes il s'agit de CONCENTRATION c'est à dire d'un rapport entre la quantité d'ions sur le volume.  [...]