• Santé - Volume, ARN, Concentration

[Biologie Moléculaire] qRT-PCR

J'ai extrait l'ARN total puis dosé par spectro. Mon problème est à l'étape de la RT. Mes concentrations sont d'environs 30µg/mL (dans un volume de 30µL d'eau). Sur tous les protocoles que j'ai pu voir, les RT sont effectués à partir de 1µg d'ARN dans un volume final de 20µL, je n'ai pas de tels quantité.  [...] Je voulais donc savoir si je pouvais réaliser des RT sur 300 voir 250 ng d'ARN tout en conservant les différents réactifs à bonne concentration (donc dans un volume final de 20µL).  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification d'ARN

Je suis en première année de thèse et après mon extraction d'ARN, j'ai une concentration de 8 ng/µL environ, dans un volume final de 11 µL (kit PicoPure de chez Arcturus, après microdissection). Je voudrais amplifier mes ARN car je dois étudier une dizaine de gènes en PCR temps réel, donc je n'aurai pas assez de matériel de départ (car il faut environ 50 ng d'ADN par puits...).  [...] Lequel vaut vraiment le coût Lequel est plus efficace qu'un autre.   [...]

Echec de qPCR

1- Calculer le volume d'ARN et H2O nécessaire pour chaque échantillons afin d'obtenir une concentration identique.  [...] as-tu dosé tes acides nucléiques quels étaient les concentrations après reverse transcription quels ratios de purité as-tu obtenu (le 260/280 et 260/230).  [...]

[Biologie Moléculaire] Que devient l'ARNr dans une reaction de RT

Pour la thèse de la dilution ce n'est pas ça, je travaille souvent avec peu de matériel, j'utilise bien 1µg d'ARN pour faire mon cDNA que j'utilise dans un volume total de 40µl...la dilution n'est donc pas très élevée.  [...] De plus, j'ai fait un rapide calcul. vous dites que vous avez un volume final de 40 microlitre à la fin de la RT et que vous mettez 1 microgramme d'ARN. Si mon calcul est juste, cela vous donne une concentration de 25 nanogramme/microlitre. attention vous êtes à la limite de détection d'une puce ARN Nano.  [...]

[Biologie Cellulaire] Membrane Plasmique

Cela est conforme avec ce qu'on connait de la diffusion. plus on augmente le gradient de concentration, plus les molécules diffusent rapidement.  [...] On ne peut parler de concentration que dans un volume bien défini, ici une concentration extracellulaire, ou une concentration intracellulaire.  [...]

[Divers] Calcul molaire

J'expose, je souhaite preparé une solution mere de 100 ml concentré 100 X composé a 100 µMole d'iaa. Le calcul devant prendre en compte la pureté du produit (95%).  [...] m = C * M * V, la masse (en g.) égale la concentration (en Mole/L) multiplié par la masse moleculaire (en g./Mole) multiplié par le volume (en L).  [...]

[Biologie Moléculaire] j'ai besoin d'aide concernant mes echantillons d'ARN

j'ai eu des echantillons d'ARN tres concentrés apres dosage par spectro,quand j'ai fait le calcule pour faire la reverse transcription,le volume que je dois prelever est tro petit à prelever(=de 0.44µl)alors que ma pipette mesure à partir de 0.5µl,je ne sais pas quoi faire.  [...] tu dilues 2x ton échantillon, et tu prélèves 0.88ul de cette dilution au lieu de 0.44ul de la solution concentrée. Sinon c'est encore plus simple de diluer 10X et de prélever 4.4ul (plus les volumes sont importants, plus les erreurs sont proportionnellement faibles).  [...]

[Biochimie] Résultats de purification de lysozymes

Ensuite on a effectuer une électrophorèse, l'électrophorèse étant qualitative, il faut de forte concentration en enzymes (ça je le sais...) dans la fraction Fo (ya toutes les protéines) F1(adsorption) F2 à F4 (normalement que les protéines - voir rien du tout en F4) c'est le lavage, puis la désorption en F5 et F6 ( ou on ne doit avoir que du lysozyme au vue de mes résultats que j'affiche plus bas) tout a marché sauf en F4 où il n'y a que du lysozyme.  [...] Mais notre prof nous fait calculer le volume initiale (avant centrifugation) puis volume finale (après concentration) afin de calculer le facteur de concentration. MAIS A QUOI çA PEUT BIEN ME SERVIR.  [...]

[Biochimie] Problème pour un exercice ...

Merci de m'aider j'ai l'impression qu'il manque des données pour trouver les paramètres caractéristiques de la cinétique Michaelienne.   [...] Pour moi il te manque le volume réactionnel et la concentration de enzyme dans ce volume (après j'affirme rien).  [...]

[Biologie Moléculaire] Pureté de L'ADN

reduire la concentration des contaminants en diminuant le volume de matrice ou en augmentant le volume réactionnel.  [...] Sinon, si tu es une grosse brute, prépare ton ADN au Chlorure de Césium, la pour le coup il sera propre ton ADN (mais faut etre motivé.P ).   [...]