• Santé - Voltage, Transfert, Sec

[Biologie Moléculaire] Western blot brûlé

J'expose mon problème.. Dans le cadre d'un TP j'ai dû effectuer un Western Blot. Au moment où j'ai voulu récupérer ma membrane de nitrocellulose après transfert, il s'est avéré que tout à cramer./ La seule erreur de faite est que j'ai inversé l'anode et la cathode au niveau du générateur.  [...] Oui j'ai effectué un transfert semi sec. On devait réglé à 100mA constant et le voltage en début de transfert était de 16V.  [...]

[Biochimie] Western blot en pointillés

On a augmenté le voltage du transfert (30V au lieu de 22, transfert semi liquide) au cas où ca transferait pas bien mais le résultat n'a pas changé.  [...] Tout se transfère très bien, sans augmentation notable de la température (avantage du transfert sans SDS), et les protéines de bas poids moléculaire (20 kDa), se transfère aussi bien. Tu peux donc essayer d'allonger le temps de transfert, voire de faire un faible voltage sur la nuit à 4°C.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western Blot Transfert sur membrane

Tu peux aussi essayer de diminuer le voltage, sans augmenter le temps de transfert pour être sure que tes protéines de bas PM diffusent dans le tampon.  [...] Tu peux aussi essayer de diminuer le voltage, sans augmenter le temps de transfert pour être sure que tes protéines de bas PM ne diffusent pas dans le tampon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

2) Je souhaite transférer une protéine de 210 kDa sur membrane PVDF. J'ai fait un transfert à 70V sur 90 min mais les hauts poids moléculaires n'ont pas bien transféré (il restait un peu d'échelle dans mon gel). Quelqu'un a une idée des meilleurs conditions de tranfert pour ce type de protéines J'ai entendu parler de transfert overnight à 4°C 12V.  [...] Pour le transfert de ta protéine, fait le 2H à 100 V (en utilisant un bain de glace bien sûr). Sinon garde le même voltage mais laisse plus longtemps. Je n'utilise pas le PVFD alors moi je transfert avec de l'éthanol qui me donne de meilleurs résultats mais toi tu es obligée de prendre le méthanol.  [...]

[Biologie Cellulaire] Western Blot ATM phosphorylé

J'ai déjà testé de nombreux protocoles sans succès (méthodes d'extraction différentes, migration sur petit/grand gel, transfert liquide/semi-sec..), donc j'aimerais savoir si quelqu'un possède un protocole précis ou des indications.  [...] Et au niveau blot, j'ai déjà essayé pas mal de paramètres. petit/grand gel, faible pourcentage d'acrylamide (6-7%), transfert liquide éthanol/méthanol avec différents temps et voltage.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

4-Pour le transfert proprement dit, tu m'avais dis qu'il n y avait pas de tampon et que les conditions étaient déjà pré-établies, peux tu STP regarder sur ta machine et me dire quelles sont ces conditions (temps, voltage ou ampérage).  [...] Les temps/voltage/ampérage optimaux pour le transfert sont dépendants du système que tu utilises, ça n'a pas de sens de prendre les mêmes paramètres pour des systèmes différents. Le mieux est de suivre exactement les recommandations du constructeur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ampérage d'un transfert western blot

Voilà deux semaines que je réalise des transferts sur membrane PVDF de gel 2D. Le transfert se déroule sur toute la nuit à 4°C à voltage constant (30V).  [...] Ma question est donc simple. pourquoi cette augmentation de la résistance Le tampon de transfert aurait-il changé durant la nuit Se serait-il chargé en sels.  [...]

[Biologie Cellulaire] Transport actif dans le sens du gradient

je suis pas réelement sur que ça existe... au mieux ça prendra la forme de cannaux voltage-dépendant ( pour le gradient electro-chimique).  [...] L'ouverture du canal nécessite effectivement une activation (un transfert d'énergie) par un changement de voltage au voisinage de la membrane, mais le transport en lui même est spontané (dans le sens du gradient, exergonique,...), et est donc passif par définition.  [...]

potentiel d'action

Si j'ai bien compris votre question, en générale le neurone pré-synaptique ne libère ses neurotransmetteurs que si ses canaux calcique (voltage-dépendants) soit ouverts par le potentiel d'action ( le ca2+ joue un rôle de second messager ) et ces neurotransmetteurs qui sont dans la fente synaptique qui vont transformer le signal chimique en signal électrique en engendrant le potentiel d'action dans le neurone post-synaptique ou dans le cas des cellules musculaire ( dans ce cas on parle des neurotransmetteurs excitatrices ).  [...] Tout d'abord, vous parliez de tubules transverses dans votre premier post. Les tubules transverses sont des replis membranaires présents dans les fibres musculaires uniquement. Ils permettent une propagation de la dépolarisation des fibres musculaires. Cette dépolarisation permet l'ouverture de canaux calciques voltage-dépendants de type L.  [...]

[Biochimie] electrophysiologie

c'est pas exactement ça le mécanisme, en fait l'entrée de glucose entraine une augmentation de [ATP] dans la cellule, ce qui ferme un canal K sensible a l'ATP, d'ou une hyperpolarisation qui ouvre des canaux Ca++ voltage dépendants -. fusion des granules et sécretion d'insuline.  [...] entrée de glucose entraine une augmentation de [ATP] dans la cellule, ce qui ferme un canal K sensible a l'ATP, d'ou une hyperpolarisation qui ouvre des canaux Ca++ voltage dépendants -. fusion des granules et sécretion d'insuline.  [...]