• Santé - Vecteur, Plasmide, Transformation

[Génétique] Construire un vecteur de transgenèse dérivé des transposons

J'aimerai avoir quelques explications sur le transposon. Où est ce qu'on le trouve à l'origine Est ce qu'il reconnait toujours la même séquence nucléotidique Quels sont les mécanismes qui lui permettent de faire passer un gène d'intérêt dans un vecteur (plasmide).  [...] Mais ceci dit, je ne comprends toujours pas pourquoi utiliser un transposon pour introduire un gène d'intérêt dans un plasmide... Si je veux l'introduire in fine dans le chromosome bactérien, je peux très bien faire une cassette avec des extrémités précises où une recombinaison homologue pourra se faire.  [...]

[Microbiologie] banque génomique

triction Eco RI, Eco RV et Pst I. le plasmide ou vecteur d'expression (pBlueScript) a été également traité par les mêmes enzymes. lig+transformation+criblage par pcr. je suis arrivée au séquençage. mon encadreur qui a vu la sé-.  [...] quence obtenue m'a informé que j'ai effectué une erreur lors de la digestion enzymatique. Je ne suis pas d'accord avec elle parce que je me suis dit que les amorces que j'ai pris sont spécifiqUES DU Gène Mm14 de la souche en question, mais je me suis dit que c'est en rapport avec le clone recombinant que j'ai obtenu (ADN digéré par Eco RV).   [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

- l'efficacité de transformation obtenue avec le produit de ligation. nombre de colonies / µg d'ADN de plasmide digéré incubé avec insert et ligase.  [...] La seule chose que je peux te dire c'est que la manip de transformation des bactéries par le vecteur seul a raté, et qu'un très faible nombre de colonies a donc pu se développer. Par curiosité, combien de colonies par µg d'ADN as tu obtenu dans le contrôle et dans la transformation avec vecteur + insert.  [...]

[Biologie Cellulaire] Plasmide eucaryote/bactérien dans une lignée cellulaire

Lors d'une transformation transitoire, est ce que les histones se lient a l'ADN du vecteur pour former des nucléosomes ou la petite taille du plasmide empêche justement les nucléosomes de se former Observera-t'on une différence entre un plasmide eucaryote et un plasmide bactérien au niveau de ces nucléosomes.  [...] J'utilise des HEK-293 et mes conditions de transformations pour cette souche sont optimales (~ 90% de cellules transformées). J'ai déjà transformée cette lignée avec d'autres plasmides qui ont bien exprimés leur gène donc je doute que ça soit la transformation qui pose problème.  [...]

Biographie | Jean-Pierre Bachy - Physiologiste | Futura Santé

- Permutation chaotique réversible des composantes d'un vecteur. Application à la transmission de données en milieu bruité, brouillage d'image, orthogonalisation de vecteurs binaires destinés au stockage sur mémoire associative, stockage d'information sur une structure en boucle.  [...] Etude d'une transformation réversible qui réalise une permutation chaotique des composantes d'un vecteur, et applications au brouillage de textes, images,  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de ligation??

je vais donc essayé de le passer sur un autre vecteur (pstar) j'ai donc bien un site bamH1 et EcoR1 sur le plasmide de meme pour mon insert donc ca devrait bien se liger (ligase TAKARA), je pense avoir bien fait ma trasformation mais je n'ai pas de colonies sur mon LB, je ne comprends pas pourquoi.  [...] J'ai d'une part fait une ligation avec mon plasmide(digéré), l'enzyme et sans mon insert et d'autre part le plamide,l'insert et l'enzyme je n'ai donc pas de contrôle plasmide liguer par contre je ne pense pas que se soit forcement la transformation vu que d'habitude je n'ai pas de problemes mais j'ai tout de même un petit doute sur la ligation avec la TAKARA qui préconise 5min à 25°C ou 30min à 16°C j'ai donc essayé les deux methodes et j'ai même prolongé à 2h30 à 16°C donc est ce que quelqu'un a déjà eu un soucis avec cette enzymz car les temps de ligation me semblent courts...sinon je ne vois pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

N'ayant pas de marqueur de sélection pour mes plasmides recombinants, je dois m'assurer d'une bonne linéarisation et déphosphorylation de mon plasmide pour éviter d'avoir des plasmides natifs. Donc, pour m'assurer dans un premier temps de la bonne linéarisation, je transforme avec le plasmide linéarisé.  [...] Si tu fais une transformation avec 100ng de plasmide tu peux avoir beaucoup de transformants. Alors si tu peux 1micro gramme de plasmide que tu digères, s'il reste même moins de 10% de plasmide non digéré tu vas avoir des soucis lors de ta transfo.  [...]

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

j 'ai procédé à la ligation ds les proportions 1/1, 1/3, et1/5 mais aprés transformations ds ECOLI (top 10), extraction plasmidique par lyse alcaline et screening par pcr...Pas de clonage. j'ai fais 3 tentative jusque la.  [...] Pour commencer, je pense pas qu'il sagit de la ligase car a chaque ligation jeffectue un controle ligase. j'utilise le vecteur simplement digéré auquel j 'ajoute la ligase pour controler la qualité de la ligase car le plasmide simplement digéré se ferme facilement avec la ligase et si aprés transformation je trouve des colonie qui poussent sur le milieu additionné d antibiotique c'est que la ligase est OK et c'est mon cas.  [...]

bactéries (reproduction)

TRANSFORMATION = transformation d'1 ADN étranger dans 1 bactérie par l'intermediare d'1 vecteur.  [...] Cette classification date de 1968 (N.E. Gibbons et R.G.E. Murray ). On l'utilise tellement en cours de licence (et probablement autant à al rentrée en maitrise ) que c'est devenu un automatisme.   [...]

[Génétique] Manipulation génétique chez procaryote

Le plasmide pL31 est introduit par transformation dans la souche L4 qui contient une mutation conditionnelle dnaAts(thermosensible). La souche L4/pL31 est cultivée a 30°C dans un milieu riche sans ampicilline, pendant 6 heures.puis une partie de la culture est transfere à 42°C,pendant 16h,l'autre partie etant maintenue à 30°C.  [...] transformation par recombinaison homologue en quoi la recombinaison homologue a un lien avec la transformation surtout chez les bactéries. Non ton plasmide se multiplie grace a une origine de réplication.  [...]