• Santé - Vecteur, Plasmide, Différent

[Génétique] Virus vecteur binaire

J'ai une question que je me pose depuis qque temps et qui peut vous paraître stupide... Lorsqu'on utilise un virus avec un vecteur binaire est il possible que chaque plasmide soit dans un virus différent ou les deux plasmides doivent être dans le même virus.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

Ensuite on met ces plasmides dans des bactéries dans un milieu avec de l'ampicilline pour voir lesquelles résistent et donc lesquelles portent la protéine qui nous intéresse.  [...] On ne clone pas avec un plasmide mais dans un plasmide. Cloner, c'est le fait de reproduire à l'identique quelque chose. Un clone, c'est l'ensemble des éléments identiques (deux jumeaux forment un clone). Ainsi pour cloner de l'ADN, on l'insert dans un vecteur (dans votre cas un plasmide) et on amplifie la quantité de vecteur.  [...]

Questions sur les éléments d'un vecteur de clonage

-Une fois la transfection effectuée, on doit sélectionner les bactéries ayant bien reçus ce plasmide sur milieu avec antibiotique. Encore une fois, ce fameux codon stop empêche selon moi la transcription du gène de résistance et donc ne permet pas aux bactéries de devenir résistantes.  [...] L'expression des différents gènes contenus dans un tel plasmide est indépendante. Même s'il y a en effet un codon stop après le MCS, il y a des promoteurs indépendants pour chacun des autres gènes comme celui de résistance. Du coup je pense que cela répond a toutes tes questions, sinon tu peux toujours continuer la discussion.  [...]

[Génétique] pb clonage moléculaire

Traitement de l'ADN linéarisé du plasmide vecteur avec la phosphatase alcaline qui enlève les groupes 5' phosphate terminaux évité la recirculation du vecteur et la formation de dimères de plasmide. Après ce traitement, on puisse donc ajouté l'insert.  [...] Une masse moléculaire peu élevée des plasmides car, ils sont faciles à manipuler, ils sont présents en beaucoup d'exemplaire ce qui facilite leurs isolement, mais surtout amplifier l'expression de tout les gène qui y sont clonés. En plus leur taille augmente la probabilité d'y trouver des sites de restriction unique.  [...]

Manipulations génétiques

je me ferai un plaisir de t'expliquer si tu connais les notions de PCR, séquences nucléotidiques complémentaires, arn polymérase, plasmide, vecteur, recombinaison homologue ^^.  [...] Ensuite tu peux insérer ton gène dans un plasmide vecteur (procédé encore compliqué, avec des notions de multi site de clonage etc etc ^^).  [...]

[Biologie Cellulaire] Expression stable: perte du transgène

j'essaie de produire des lignées stables en les transfectant (via liposomes) avec un vecteur plasmidique portant un gène de résistance (sélection au G418) et gène rapporteur (beta galactosidase). Les lignées (293 et CHO) présentent une bonne expression transitoire à 48h, mais quand je passe à la sélection au G418, les 293 meurent en une semaine et pour ce qui est des CHO j'obtiens des clones résistants au G418 (à partir de trois semaines et plus) mais qui n'expriment pas beta gal.  [...] ..). Mon plasmide est construit de manière équivalente, pourquoi donc en irait-il différemment Et je repose donc la question, n'y aurait-il pas une manière d'améliorer l'efficacité de la manip (cycle cellulaire, linéarisation du vecteur différente, etc...).  [...]

levure s. POMBE

le gène d'intérêt est alors inséré dans un vecteur (en général un plasmide), qui doit être capable de se répliquer et de répliquer le gène étranger qui lui est rattaché.  [...] Après tout ça je dois essayer insérer la bonne séquence dans un plasmide (Vecteur) et n'oublie pas la procéder par une bonne promoteur. Puis les méthodes de transfection nous aideront à introduire le gène dans la cellule méchante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de ligation??

je vais donc essayé de le passer sur un autre vecteur (pstar) j'ai donc bien un site bamH1 et EcoR1 sur le plasmide de meme pour mon insert donc ca devrait bien se liger (ligase TAKARA), je pense avoir bien fait ma trasformation mais je n'ai pas de colonies sur mon LB, je ne comprends pas pourquoi.  [...] A ta place je réaliserais déjà un clivage séparé du vecteur avec BamH1 et EcoR1, tu fais migrer sur agarose le plasmide non clivé, le plasmide + BamH1, le plasmide + EcoR1. Là tu vois si ton vecteur est bien clivé par les deux enzymes de restriction.  [...]

Clonage dans un vecteur

bonjour. je voudrais savoir comment peut-on augmenter l'efficacité du clonage des fragment d'ADN d souris dans les vecteurs.  [...] Merci de ne pas poster plusieurs fois le meme messages a des endroits différents et de créer une discussion spécifique plutot que de poster vos messages dans des discussions sans rapport. Yoyo.  [...]

[Génétique] Construire un vecteur de transgenèse dérivé des transposons

J'aimerai avoir quelques explications sur le transposon. Où est ce qu'on le trouve à l'origine Est ce qu'il reconnait toujours la même séquence nucléotidique Quels sont les mécanismes qui lui permettent de faire passer un gène d'intérêt dans un vecteur (plasmide).  [...] Mais ceci dit, je ne comprends toujours pas pourquoi utiliser un transposon pour introduire un gène d'intérêt dans un plasmide... Si je veux l'introduire in fine dans le chromosome bactérien, je peux très bien faire une cassette avec des extrémités précises où une recombinaison homologue pourra se faire.  [...]