• Santé - Utilisation, Tampon, Réaction

[Biochimie] PCR: a quoi servent les differents elements

*Le tampon, c'est pour le bon fonctionnement de l'enzyme. il lui faut un pH particulier qui ne doit pas évoluer au court de la réaction. Or, les dNTP et l'ADN n'ont certainement pas les mêmes propriétés acidobasiques. d'où l'utilisation du tampon.  [...] Les brins d'ADN et surtout ceux d'ARN sont très fragile, d'où l'utilisation de solution tampon pour éviter tout changement de pH pouvant ainsi casser la molécule ainsi pour avoir un pH qui sera optimum à l'action de la Taq Polymérase.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mg2+ et PCR

Petite question. dans mon cours sur la PCR, j'ai noté qu'on utilisait du Mg 2+ pour neutraliser les charges des phosphates de l'ADN. On se retrouve donc avec des matrices ADN pour PCR neutres. Mais lorsqu'on effectue la migration électrophorétique sur gel d'agarose, comment l'ADN va-t-il migrer s'il n'est pas chargé.  [...] Merci de la correction Loupsio. Tant qu'on est dans le sujet, j'ai sur mon polycopié indiqué que le KCl ajouté dans le milieu de réaction de PCR était là pour activer l'ADN polymérase... Est-ce vrai ou est-ce encore une erreur de la prof.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADNc simple, double brins et PCR

En utilisant cet ADNc dans une réaction PCR classique, avec tous les composants de la réaction (tampon, MgCl, dNTP, Taq, 2 oligo spécifiques..) on peut amplifier un fragment double brin.  [...] Autrement dit, dans une réaction PCR classique et à partir d'ADNc simple brin, la Taq synthèsera d'abord le deuxième brin d'ADNc avant d'amplifier le fragment délimité par un couple d'amorces utilisés dans cette réaction Ou bien, une fois qu'on a la Taq, elle prend l'ADN (simple ou double brin) comme matrice pour synthétiser un autre brin et ainsi de suite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Profil PCR/RAPD

je viens de procéder à une amplification PCR avec deux amorces différentes, pour chaque amorce j'ai utilisé un tampon de réaction différent juste pour voir ce que ça donnait lors de la migration (l'un coloré l'autre transparent).  [...] 1-les échantillons avec le tampon de réaction transparent auquel j'ai ajouté un tampon de charge n'ont rien donné= aucune bande, rien, nada.  [...]

[Biochimie] Utilisation du bain marie dans le dosage des enzymes

Je suppose que l'utilisation du bain mari c'est pour donner une température adéquate à la réaction lors de sa provocation dans la cuve du spectrophotomètre. Mais là je pense ceci. le tampon et la substance distinée à régire avec l'enzyme sont conservés à une température de 26C°, Ok MAIS l'homogénat et sur la glace 4C° et au moment du mélange dans la cuve 4C° et 26C° je ne sais pas ce que ça va donner.  [...] De plus, votre réaction enzymatique va durer plusieurs minutes alors que les échanges thermiques se feront beaucoup plus vite dans ces conditions et seront terminés au moment où vous ferez vos observations sur l'activité de l'enzyme (le calcul de la vitesse de réaction ne se fait pas au tout début de la réaction).  [...]

calcul???

j'ai une manip estimation de l'activité enzymatique. j'ai vu sur un article qu'il faut broyer 1g de feuille avec 5ml du tampon phosphate 50mM (pH7). après une fois qu'on aura preparé l'extrait enzy, l'estimation de l'enzyme SOD se fait selon la reaction suivante.  [...] - comment avoir les volumes à utiliser pour chaq sub pour la réaction est ce que je devrais préparer des solutions mère avec des concentrations que je définie et après je calcul le Volume de prise de cette solution pour avoir la concentration demandé dans le volume de 3ml de reaction.  [...]

Définition | Spermicide | Futura Santé

Il est nécessaire de se reporter à la notice d'utilisation de chacun d'entre eux car les conditions d'emploi sont différentes selon qu'il s'agit de gel ou de tampon. Ils ont une durée d'action variant de quelques heures (ovules, crèmes) à 24 heures (tampon).  [...] Avant de procéder à une toilette, il est nécessaire de se reporter à la notice, l'utilisation de certains savons neutralisant leur action. Ils doivent être utilisés avant chaque rapport sexuel.  [...]

[Biochimie] cinétique enzymatique

a) On veut déterminer l'influence de la concentration en enzyme sur la vitesse de la réaction. on ajoute à un mélange comprenant 1 ml de tampon pH 7,0 et 1 ml de substrat à concentration saturante, 1ml de solution d'invertase pure de concentration variable.  [...] b) On veut déterminer l'influence de la concentration en substrat sur la vitesse de la réaction. on ajoute à un mélange comprenant 1 ml de tampon pH 7,0 et 1 ml d'invertase de concentration identique, 1 ml de solution de saccharose de concentration variable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Taq DNA polymerase et Go taq DNA polymerase

La particularité de ce tampon est d'être un tampon de réaction ET un tampon de chargement (tu charges directement sur gel après la PCR).  [...] Est ce que quelqu'un serait en mesure de m'expliquer pourquoi le tampon de la taq est coloré en vert est quel est l'avantage d'utiliser ce type de tampon.  [...]

[Biochimie] Tampon TE

A la fin d'un extraction d'ADN, je me suis trompée, jai utilisé du tampon TE 10X au lieu du tampon 1X.. et mes mesures au spectrophotometre me montrent que jai tres peu voir pas du tout d'ADN.. pensez vous que ce soit dû à l'utilisation de tampon TE10X Est ce que je peux y remedier parce que le probleme cest que je nai plus les echantillons à l'origine de l'extraction.  [...] La force ionique est un parametre essentiel pour le decrochage de l'ADN des colones, donc oui avec un TE10X tu as toute les chances que l'ADN soit encore dans la colone.   [...]