• Santé - Utilisation, Enzyme, Restriction

[Biologie Moléculaire] révélation RFLP

concernant l'utilisation des RFLP dans le diagnostic génotypique cette methode necessite le couple sonde/ enzyme de restriction, cela réfère a la technique southern blot, mais cette technique est très lourde. est ce qu'il ya un autre moyen pour rééler les RFLP.  [...] SI c'est une simple RFLP, je ne vois pas l'intérêt de la sonde. Une fois la digestion par l'enzyme effectuée, une simple migration sur gel d'agarose avec un argent marquant l'ADN devrait suffire à visualiser les fragments et à donner une bonne idée de leur taille.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme en biologie moleculaire

Débutant en biologie moléculaire et en génétique je me heurte depuis quelques jours a un problème demeuré irrésolu (ceci est vraiment important car il figurera dans mon exposé sur la biologie moléculaire et ses applications prévu dans deux semaines)aussi je vous adresse avec espérance une question qui demeurera fondamentale pour mon expo et pour ma culture générale (faut pas l'oublier aussi )alors comment font les généticiens pour repérer dans le fouillis moléculaire de l'ADN un gène particulier,le font-ils manuellement ou par une suite logiciel comme l'annonce Christian velot chercheur en bm.   [...] Alors pour vous octroyer plus d'amples informations,je voulais dire repérer un gène dont la fonction nous est connu (par ex production d'une certaine enzyme,protéine etc)et le trouver dans l'amas cellulaire que constitue le génome,personnellement je pensais que les chercheurs en biologie moléculaire utilisaient un logiciel spécifique(suite a la conférence sur les OGM et leurs applications de Hugues mounet et Christian velotde 2008 )par contre leur isolation m'a ete recemment eclaircie de par l'utilisation d'enzymes de restriction.  [...]

enzymes de restriction

quelles sont les differentes utilisations pratiques en medecine ou en science par exemple des enzymes de restriction et quelles sont les methodes qui se fondent sur ces derniers.  [...] toute la génétique moléculaire moderne à partir du milieu des années 70 est basée sur l'utilisation des enzymes de restriction (vrai nom = restriction endonuclease),  [...]

[Génétique] Clonage animal (question)

utilise-t-on des enzymes de restriction ou des plasmides pour cloner un animal ou encore pour faire du clonage thérapeutique.  [...] Pour moi, à partir du moment où on parle de clonage (tout court) il n'y a pas d'utilisation d'enzyme de restriction. la technique de clonage, qu'il soit reproductif ou thérapeutique, est de transférer directement un noyau d'une cellule quelconque dans un ovule.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de ligation

Ca fait deux semaines que je tente de faire une ligation entre pCLNCX et mon insert. J'ai coupé mon plasmide par HindIII et amplifié mon insert avec des amorces contenant le même site de restriction HindIII, la taille de mon insert est bonne. celle de mon plasmide aussi, il a bien été digéré car j'ai comparé le plasmide digéré ou non.  [...] est- ce - que tu as procédé à une déphosphorylation de l'extrémité 5' de ton plasmide digérée l'utilisation d'une phosphatase alcaline est necéssaire dans l'étape qui précède la ligation puisque tu utilises un seul enzyme de restriction... car au moment de ligation il va être plus facile à un plasmide de se recirculariser plutôt qu'intégrer une autre séquence.  [...]

[Biochimie] Petite interrogation sur les enzymes de restrictions

Note. les enzymes de restriction sont excessivement nombreuses et, bien que je ne connaisse par leur utilisation lors d'une PCR (plutôt sur les étapes amont/aval, non ), je ne pense pas qu'on en utilise 36 pour une même manip.  [...] Excuse moi si je n'est pas utilisé le bon terme, j'ai écris ce message un peu rapidement, c'est vrai que c'est LA PCR et, vous avez raison, il n'y a pas d'enzyme de restriction mais ce sont les enzymes polymérase dont je parlais (ou TAQ polymérase). Voilà après cette correction pouvez vous répondre à ma question précedemment posé.  [...]

Confirmation de l'insertion d'un gène dans un plasmide

Je travaille actuellement sur un clone et je veux savoir s'il est possible de confirmer une ligation entre un gène et un vecteur plasmidique et par quelle méthode puis¬je la faire.   [...] Oui c'est toujours comme cela que l'on fait d'ailleurs. On établit la carte de restriction du plasmide en utilisant des enzymes de restriction. A minima, une enzyme de restriction qui ne coupe qu'une fois permettra de linéariser le vecteur et d'en trouver la taille en faisant migrer le produit de digestion dans un gel d'agarose.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage Gateway...intérêt ?

- un premier intérêt est celui que tu dis. tu n'utilises pas d'enzymes, pas besoin de choisir 2 enzymes différentes, de déphosphoryler le plasmide, phosphoryler les primers...ect... une simple PCR suffit pour l'obtention de ton gène avec les séquences nécessaires à l'introduction dans le plasmide.  [...] ça revient au même qu'avec les enzymes pour l'insertion dans ton second vecteur sauf que là encore, tu n'a pas besoin de rédigérer ton fragment à partir de ton premier plasmide pour le mettre dans un plasmide d'expression. Ici, avec le système gateway, ton plasmide d'entré va directement servir à la recombinaison avec ton second plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Site de restriction

1- ecrit un site de restriction sur le papier enzyme regarde ou l'enzyme va couper, et essaye de trouver tous les moyens de couper. tu vas vite t'appercevoir qu'il y a deux grandes familles de coupures.  [...] Chaque outil de découpe représente une enzyme de restriction différente et chaque endroit où la coupure est plus facile devrait représenter le site de restriction spécifique à l'enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment crée un site de restriction pour une enzyme

[Biologie Moléculaire] comment crée un site de restriction pour une enzyme.  [...] s'il vous plait aidez moi à crée un site de restriction de l'enzyme DraI qui coupe dans la région palindromique TTTAAA.  [...]