• Santé - Transgénèse, Marqueur, Séquence, Intérêt

marqueurs genetiques

Le gène marqueur doit entraîner un phénotype facilement repérable. Au hasard, si on obtient une certaine coloration chez le mutant, c'est que le gène d'interêt a bien été intégré.  [...] Et effectivement en transgenese on appelle marqueur une sequence introduite avec la sequence d'interet qui permet de detecter sa presence.  [...]

séquence kozak

je souhaite faire une transgénèse chez la drosophile, je dispose d'un vecteur possédant le promoteur qui m'intéresse. De plus, j'ai également l'ADNc d'interet avec les séquence 5' et 3' UTR mais je clone directement à l'ATG. Je vais créer un site de restriction avant cet ATG afin de pouvoir le cloner faut il aussi que j'ajoute une séquence Kozak pour avoir une bonne expression de ma prot ou n'est ce pas nécessaire.  [...]

Une expérience de transgénèse chez la souris

ca me parait un peu surprenant il manque des info selon moi, ou sinon c'est pour avoir un schéma de protocole général j'ai envie de dire. en gros une des possibilité c'est que tu prélève des blastomères de souris tu réalise sur ces cellules une transgenèse de remplacement c'est à dire que tu remplace la séquence codant pour ta protéine d'interet par une séquence codant pour la GFP (par recombinaison homologue).  [...] APrès il faut faire ca plusieurs fois et faires pleins de croisements entre les souris qui ont subi la transgenèse pour avoir au final une lignée de souris transformée (il faut aussi vérifier la stabilité de la transgenèse en étudiant plusieurs génération).  [...]

transgenèse

coli par ex pour multiplier cette séquence d'adn qui nous intéresse. C'est l'étape nécessaire de multiplication de la construction génétique pour disposer d'une quantité suffisante d'adn à intégrer afin d'avoir des chances raisonnables de réussir la transgénèse proprement dite.  [...] Seules sont conservées les séquences bordantes de l'ADN T, indispensables pour le transfert, qui encadrent la construction génétique que l'on souhaite intégrer dans la plante (un gène d'intérêt accompagné généralement d'un (ou de) gènes permettant la sélection des cellules transformées).  [...]

Mutagenèse dirigée : un Nobel pour des souris mutantes

Un exemple très intéressant est celui des souris non plus KO mais knock-in. Le gène est toujours inactivé mais il l'est par l'insertion de la séquence codant pour la GFP ( green fluorescent protein ) dans la séquence codant pour la protéine. Comme on peut l'imaginer ceci a pour effet de suivre le devenir des cellules dans l'organisme.  [...] Ceci est rendu possible par de la transgénèse classique (insertion aléatoire d'un fragment d'ADN exogène dans un génome). Le transgène utilisé est alors la séquence codante de la Cre sous le contrôle du promoteur d'une protéine spécifiquement exprimée dans le tissu qui nous intéresse.  [...]

enzymes de restriction

au départ ces enzymes font partie du mécanisme de défence des bactéries qui s'oppose à toute introduction de DNA étranger venant de l'extérieur,   [...] heu encore une autre question.quel est l'intérêt que présente l'utilisation des enzymes de restriction dans le bricolage des vecteurs qui sont utilisés pour la transgenèse.  [...]

[Biotechnologie] Plasmide recombinant

2) le plasmide possède systématiquement un gène de sélection (pour vérifier la présence du plasmide) ainsi qu'un gène phénotypique - dit gène raporteur- pour verifier la présence de la séquence d'intérêt dans le vecteur plasmidique.  [...] Donc, comme le T-DNA peut entrer dans une cellule végétale, ce qui est intéressant c'est qu'on peut le remplacer par un gène d'intérêt et vive la transgenèse simple.  [...]

[Biologie Moléculaire] RFLP et transgenése

salut est ce que je peux savoir pour quoi on préfére d'utiliserdes sondes cDNA que des sondes génomiques pour le repérage de gène d'intéret par RFLP lors du transgenése.  [...]

[Biotechnologie] la création variétale

En voici quelques uns. la sélection par marqueur assistée (SAM), l'haplodiploïdisation (génération de 2n à partir de 1n), l'embryogenèse somatique (génération d'embryons à partir de cellules somatiques), fusion des protoplastes, mutagenèse (chimique. EMS, physique), variation somaclonale (on exploite l'apparition spontanée de variants sur les plants cultivés in vitro), transgenèse.  [...] L'objectif du sélectionneur, le plus souvent, est d'éliminer les séquences d'ADN parasites de la variété donneuse autour du QTL d'intérêt, pour affiner son introgression. c'est-à-dire n'introgresser que le QTL, avec un objet de pureté de 97%. Les marqueurs sont donc un outil de quantification idéal, puisqu'ils permettent de suivre la disparition progressive au cours des recombinaisons de certains marqueurs éloignés du QTL, et de la conservation de ceux qui sont les plus proches.  [...]

Comment activer un gène sous silence

Il n'y a pas de methode générale. On peut faire de la transgénèse avec un promoteur fort, tissu-indépendant ou tissu-dépendant, tranfecter un facteur de transcription qui permet l'expression du gène d'intérêt, etc.  [...] La déméthylation... Je conaissait déjà, mais c'était sur un petit site sans grande importance alors je me méfiais, mais puisque vous le dites. Donc la déméthylation me semble un bon moyen très simple, même si les possibilités sont limitées (j'ai l'intention d'activer beaucoup de gènes, mais pas tout le génome quand même.).   [...]