• Santé - Transfert, Protéines, Tampon

[Biologie Moléculaire] Western Blot Transfert sur membrane

Tu peux aussi essayer de diminuer le voltage, sans augmenter le temps de transfert pour être sure que tes protéines de bas PM diffusent dans le tampon.  [...] Tu peux aussi essayer de diminuer le voltage, sans augmenter le temps de transfert pour être sure que tes protéines de bas PM ne diffusent pas dans le tampon.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot / proteine hrp

A priori si tu es non dénaturant tu dois conserver la structure et la fonction de la péroxydase donc j'aurai tendance à dire que c'est possible tout en sachant que la migration et le transfert vont certainement quand même abimer ta protéine. Il faut essayer... tu me tiens au courant.  [...] Je voudrais faire la même manip que toi. Quelle est la composition de ton tampon de transfert Tu as transféré tes protéines sur membrane avec le système Biorad.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot /tampon de transfert

Rapidement...pareil, pas d'ajustement de pH et remplacement du methanol par de l'ethanol. Le retrait de l'ethanol peut ameliorer le rendement de transfert de proteines de haut poids moleculaire. On peut supprimer l'ethanol avec les membranes de PVDF, pas conseille avec les membranes de nitrocellulose.  [...] Pour répondre au dernier message, pour ma part lors des transferts de ma protéine de 26kDa que je faisais sur membrane PVDF avec le même tampon ou très très proche. Je ne dépassais pas les 25 V mais pendant 50 minute-1h. Maintenant, je t'avoue je n'ai jamais essayé autant de volt et temps pour un transfert.  [...]

[Biochimie] Western blot

oui effectivement je pense que tu peux jouer sur le temps et tenter un transfert sur toute une nuit. Les grosses protéines transfèrent mal.  [...] Cependant une personne de mon équipe a réalisé un transfert d'une très grosse protéine (. 300 kDa) et il a un tampon de transfert adapté, pris d'une publie. Il réalise son transfert à 20V à 4°C et a noté une nette amélioration du transfert des marqueurs de haut poids moléculaire comparé aux méthodes classiques.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Avant de s'attaquer au transfert, êtes-vous sûr, dans un premier temps, que les protéines de cette taille rentrent dans le gel dans vos conditions de migration.  [...] Cependant, si tu arrives à transférer des bandes plus lourdes que ta protéine, ton problème ne vient probablement pas du transfert à moins que taprotéine ait une composition en acides aminés très atypique (c'est rare pour une protéine géante). Il faudrait donc être certain que la protéine que tu cherches est bien présente et que ton anticorps la reconnait efficacement dans les conditions ou tu l'utilises.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western Blot: Transfert incomplet

Pour le moment j'essaie de transférer 20 ug de protéines par puits, les transferts sont faits à 100V à 4°C avec un agitateur dans la cuve, le temps de transfert allant de 1h à 2h45 (avec un meilleur transfert dans le dernier cas mais il doit encore rester 30 à 40% des protéines dans le gel).  [...] L'ethanol a le même effet que le méthanol Sinon je fait des gels a 10% et pour le transfert semi-sec, le probleme est que je n'ai pas d'appareil pour dans mon labo et si je me souviens bien c'est surtout conseillé pour les protéines de moins de 60 kDa non.  [...]

western blot

D'où déjà, nous avons pense au fait que le transfert total des protéines par semi-dry n'a pas eu lieu. Or nous avons observe le transfert partiel du marqueur. De ce fait nous avons utilise le gel transféré et avons refait le transfert par semi-dry et nous observons un transfert total.  [...] J'aimerais savoir comment faire pour transférer toutes mes protéines par semi- dry Est ce que le colorant (simple blue) a un effet sur le transfert total des protéines pour un semi-dry.  [...]

Protéine avec bcp de résidus acides migre de façon aberrante en western blot

La sérine aurait une possibilité d'intéragir au niveau structurel avec un autre aa de ta séquence malgrè la présence de dénaturant Même si au moment de l'injecté elle est dénaturé, le fait que le tampon de migration dilue le composée dénaturant et imaginant que ta protéine a une vitesse de reconformation 3D rapide, alors il est possible que.  [...] Il ne devrait pas y avoir de renaturation de la protéine durant la migration puisque normalement noirdez a coulé des gels contenant du SDS pour migrer en condition dénaturante, et le tampon de migration contient une quantité élevée de SDS. La seule renaturation qui peut avoir lieu est, a priori, durant le transfert car on dissocie le SDS de la protéine.  [...]

[Biochimie] Transfert western blot raté

Le problème est que je souhaite confirmer que la bande présente sur mon gel est bien celle de ma protéine, donc je réalise un WB afin de localiser spécifiquement ma protéine d'intérêt. J'ai un gros soucis lors du transfert de ma protéine du gel vers la membrane PVDF.  [...] Bref, j'ai fait un transfert il y a 2 semaines avec un protéine purifiée...c'était magique. transfert impeccable, rouge ponceau OK et tout le reste aussi. Mais là je donne ma langue au chat, mon premier transfert était complètement de coté avec des bandes en zig-zag, on m'a dit qu'il devait y avoir une bulle qui a géné le transfert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon SDS-PAGE

J'ai une autre question à propes des tampon pour les WB. Si je prépare mon tampon avec du méthanol, au lieu du SDS. Le méthanol à t'il même utilité que le SDS Permet-il aux protéines d'avoir une charge proportionnelle à leur masse.  [...] Son utilité est de dissocier le SDS de la protéine afin que celle-ci puisse interagir avec la nitrocellulose ou le PVDF, et y rester fixée. Pour cette raison, il est important que le pH du tampon de transfert soit entre 8 et 8,5 pour que la protéine migre bien vers la membrane puisque sans SDS elle migre selon ses propres charges et non plus celles du SDS qui l'entouraient.  [...]