• Santé - Transfert, électrique, Protéines

[Immunologie] immunoblote

Tu dépose l'échantillon protéique sur SDS-PAGE après migration tu fait agir l'anticorps dirigé spécifiquement contre la proteine que tu veux détecter. Cette anticorps est couplé à une enzyme ou un fluorochrome comme sa après lavage si tu detectes l'activité enzymatique ou la fluorescence sa veux dire que l'anticorps est présent est donc que le protéine est présente.  [...] Pour le western c'est un transfert électrique des protéines alors que l'immunoblot c'est un transfert qui se fait sous vide de pression.  [...]

Immunoblot

Entre la migration sur gel et l'autoradiographie tu as en plus une étape d'électro-transfert qui comme son nom l'indique permet simplement de transférer les protéines du gel vers une membrane (que tu vas ensuite utiliser pour faire l'autoradiographie), encore une fois grace à un champ électrique (car le sprotéine sont toujours chargées négativement).  [...] Non. La migration c'est lorsque le sprotéines migrent selon leur masse moléculaire dans le gel. Ensuite le transfert permet de changer ce sprotéines de support. on les passe du gel à une membrane. Le transfert utilise aussi le courant électrique mais ce n'est pas comme la migration.  [...]

[Biochimie] Questions Coomassie et Western Blot

Le méthanol et l'éthanol rendent le gel plus poreux, ce qui permet de faciliter les échanges avec le tampon (que ce soit de transfert ou de staining en coomassie). Cela permet une meilleure pénétration du coomassie dans le gel pour colorer les protéines, et cela facilite la sortie des protéines du gel pour le transfert.  [...] Pour le transfert, les solvants ont un intérêt beaucoup plus forts car ils permettent la dissociation du SDS des protéines, ce qui permet aux protéines d'interagir avec la membrane de PVDF par interactions hydrophobes et électrostatiques, mais pas ioniques comme l'exigerait une interaction avec le SDS.  [...]

Des protéines médicaments innovantes contre les maladies de l'oeil

Ceci représente un obstacle majeur au transfert de ces résultats en traitement classique. Pour remplacer l'injection répétée de protéines, des recherches ont été menées sur le transfert - au moyen de vecteurs viraux - de gènes codant pour ces protéines dans des cellules du globe oculaire, ou sur la greffe intraoculaire de cellules produisant elles-mêmes ces protéines.  [...] Ces travaux ont abouti à la mise au point d'une méthode physique de transfert d'ADN codant une protéine thérapeutique et utilisant de faibles champs électriques, surnommée électrotransfert. Ces deux équipes ont ainsi démontré, sur un modèle d'inflammation intraoculaire chez le rat, l'uvéite induite, que l'électrotransfert de plasmide (un petit ADN circulaire) dans le muscle ciliaire lisse de l'oeil, assurait une production intraoculaire locale et soutenue de protéines dans les milieux oculaires situés de part et d'autre du muscle.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Il n'y a pas de tampon de transfert étant donné que c'est un transfert à sec. Une fois que ton gel a migré, tu utilises un appareil spécial pour cela et en quelques minutes, c'est transféré. Ca revient un peu plus cher que la méthode classique (7 à 8 euros par transfert de mémoire) mais pour les grosses protéines ça marche largement mieux.  [...] Cependant, si tu arrives à transférer des bandes plus lourdes que ta protéine, ton problème ne vient probablement pas du transfert à moins que taprotéine ait une composition en acides aminés très atypique (c'est rare pour une protéine géante). Il faudrait donc être certain que la protéine que tu cherches est bien présente et que ton anticorps la reconnait efficacement dans les conditions ou tu l'utilises.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vérification transfert W.Blot

En fait quand on fait un western, on part du principe que pour des proteines de taille standard, si elle ne sont plus dans le gel apres transfert et coloration au bleu de coomassie, alors elles sont sur la membrane. Ceci est vrai si la polarité a été respectée durant le transfert, sinon les protéines sont dans le tampon et pas sur la membrane (mais dans ce cas, ce sont toutes les protéines).  [...] Un autre test a faire est de colorer la membrane apres transfert au rouge ponceau (coloration transitoire qui disparait apres lavage dans de l'eau ou du PBS). Ceci te permet de vérifier que des protéines ont bien été transférées sur la membrane, de manière homogène, et qu'il n'y avait pas de bulles d'air.  [...]

western blot

D'où déjà, nous avons pense au fait que le transfert total des protéines par semi-dry n'a pas eu lieu. Or nous avons observe le transfert partiel du marqueur. De ce fait nous avons utilise le gel transféré et avons refait le transfert par semi-dry et nous observons un transfert total.  [...] J'aimerais savoir comment faire pour transférer toutes mes protéines par semi- dry Est ce que le colorant (simple blue) a un effet sur le transfert total des protéines pour un semi-dry.  [...]

[Biochimie] tampon de lyse

Il me semble que le CHAPS (détergent doux) est utilisé pour récupérer les protéines membranaires car il a l'avantage de solubiliser les membranes sans dénaturer les protéines (à la différence de détergent fort comme le SDS). Le triton 1% est un peu léger seul dans ton cas, il n'a pour effet que de déstabiliser la membrane plasmique provoquant sa rupture.  [...] j'ai lysé mes cellules par un tampon de Karla au Bertin,le tampon renferme dees antiprotéase,PMSF,NAF,EAU,Napp.Je cherche aussi bien des protéines membranaire et du stress oxydative certaine sont cytosolique,c'est bisard j'ai fais un dosage BCA j'ai des concentrations trés faible en protéine entre é 2 et 5 mg/ml mais c'est jouable pour déposer en faisant l'éléctrophorése à la fin du transfert j'ai révéler au ponceau il n'ya pas eu de transfert sur ma membrane et effectivement à la révalation d'une protéine j'ai rien vu au chémidoc alors que les marqueurs ont transférer.  [...]

En bref : cette bactérie électrique respire des métaux

Les bactéries marines Shewanella oneidensis produisent un courant électrique en respirant. Elles peuvent en plus construire des réseaux de nanofilaments pour conduire leurs électrons à distance, par exemple vers des congénères en contact avec des métaux. Pacific Northwest National Laboratory.  [...] Les mécanismes impliqués dans le transit des charges au travers de la membrane plasmique sont méconnus, mais deux théories se détachent du lot. Le transfert des électrons peut soit directement se faire par le biais de protéines membranaires, soit être réalisé par d'autres molécules pouvant traverser la bicouche phospholipidique.  [...]

Epilepsie : une piste thérapeutique ciblée

Le transfert d'information se produit au niveau de la synapse, la zone de contact entre un axone et une dendrite. Le potentiel d'action va se propager dans tous les axones du neurone (qui jouent le rôle de câbles électriques). Les neurotransmetteurs libérés par le potentiel d'action vont se fixer sur des protéines spécialisées qui vont créer un petit courant dans les dendrites.  [...] Lorsqu'un potentiel d'action arrive au niveau de la synapse, des molécules sont libérées. Ces molécules peuvent se fixer sur des protéines spécialisées situées sur la dendrite pour générer un courant électrique de faible amplitude. Les potentiels d'action (barres verticales sur la partie gauche du schéma) peuvent aussi de propager dans les dendrites.  [...]