• Santé - Transfert, électrique, Migration

Immunoblot

Entre la migration sur gel et l'autoradiographie tu as en plus une étape d'électro-transfert qui comme son nom l'indique permet simplement de transférer les protéines du gel vers une membrane (que tu vas ensuite utiliser pour faire l'autoradiographie), encore une fois grace à un champ électrique (car le sprotéine sont toujours chargées négativement).  [...] Non. La migration c'est lorsque le sprotéines migrent selon leur masse moléculaire dans le gel. Ensuite le transfert permet de changer ce sprotéines de support. on les passe du gel à une membrane. Le transfert utilise aussi le courant électrique mais ce n'est pas comme la migration.  [...]

Intoxication alimentaire : les salmonelles utilisent l'électricité pour mieux vous infecter

Dans les expériences, l'infection générait un petit champ électrique au niveau de l' épithélium intestinal, ce qui dirigeait les macrophages vers l' anode, le pole positif du champ électrique. Mais in vitro, une fois que les macrophages ont ingéré des bactéries, ils sont attirés par la cathode. leur sens de migration est inversé.  [...] L' ingestion des bactéries par phagocytose inverserait la galvanotaxie. Ce changement est lié aux protéines chargées présentes à la surface des macrophages. De manière imagée, c'est un peu comme si les bactéries actionnaient un interrupteur électrique qui modifie le sens de migration des macrophages.  [...]

migration électrophorétique d'ARN

en travaux pratiques de génétique j'ai réalisé une migration électrophorétique d'ARN de levure que je dois analyser. Pour cela j'ai fait un dépot de témoin d'ARN de transfert et de témoin d'ARN ribosomiques. Et dans le cas des ARNr j'obtiens 4 bandes, et je ne comprends pas trop pourquoi.  [...] les 2 bandes qui ont migré le plus loin sont assez intenses donc je suppose qu'elles correspondent aux 2 sous-unités ribosomales (18S et 23S), mais pour ce qui est des 2 autres bandes, je n'arrive pas à savoir ce que c'est, elles ont migré moins loin que les précédentes et sont très peu intenses.   [...]

[1ere S] L'importance de l'électrophorese

Comme le dit Pipo, l'électrophorèse est basée sur la migration différentielle de molécules chargées électriquement sous l'effet d'un champ électrique.  [...] La migration est d'autant plus rapide que les molécules ont une masse moléculaire faible et que leur charge électrique sont importante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

un stock entre 2 et 10 est confortable. Tu peux diluer avec le même tampon qui a servi a l'extraction. D'ailleurs pour déposer en western, vu qu'il faut le même volume partout, il faut prélever une quantité d'échantillon et compléter tout le monde au meme volume avec ce tampon, c'est donc plus pratique d'en faire plus et de le conserver.   [...] Encore une. Que se passe t-il lorsqu'on load des concentrations élevées de protéines Est-ce que. la migration, le transfert et la révelation se font quand même Ou bien la concentration de protéine est-elle très importante dans les puits.  [...]

[Divers] Contenu "Matériels et méthodes" - rapport stage M1

Les extraits protéiques sont dénaturés à 95°C pendant 5 minutes en présence de LSB 1X final avant d'être déposés sur un gel de polyacrylamide dénaturant à 6%. Les immunoprécipitations sont dénaturées à 95°C pendant 5 minutes dans 25 µl de LSB 2,5X. Après migration électrophorétique, les protéines sont transférées en milieu liquide sur une membrane de nitrocellulose (HybondTM C Extra, Amersham Bioscience) pendant 1h30 dans un tampon de transfert (50 mM Tris base, 40 mM Glycine, 1,3 mM SDS et 10% éthanol).  [...] Après transfert, la membrane est bloquée dans une solution de lait 5% TBS-Tween 0,2% pendant 1 heure à température ambiante sous agitation. Elle est ensuite incubée avec les anticorps primaires anti-BRCA1 monoclonal (D9) dilué au 1/500 (Sigma®), anti-HSP60 monoclonal (CK) au 1/1000 (Sigma®) pendant une nuit à 4°C sur une plaque rotative.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dot blot

On ne sépare pas les protéines et la détection peut s'en trouver altérée (augmentation du bruit de fond notamment). Il n'y a pas d'électro-transfert et de ce fait la fixation des protéines sur la membrane est plus faible. On ne peut pas observer de shift de migration ou des migrations à des poids moléculaires aberrants et il est donc impossible de visualiser les modifications post-traductionnelles en utilisant un anticorps dirigé contre la forme totale.  [...] C'est rapide et facile, cela permet d'avoir une première réponse, mais ce n'est pas très rigoureux (en particulier à cause de l'absence d'électro-transfert).  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot difficile d'une protéine de réparation de l'ADN

4/ Vortexer fortement puis soniquer les échantillons sur glace pendant 60 s, et alors là je n'ai pas compris comment déterminer les paramètres avec ce qui est dit dans l'article. microtips at limit, 40% duty cycle Je précise que je compte utiliser le Branson sonifier 150.   [...] Il est aussi question dans l'article de bloquer le gel de migration (, jamais vu ça ) avant le transfert sur membrane de nitrocellulose, qui est également bloquée après le transfert.  [...]

[Génétique] Génotype Phénotype souris électrophorèse

On purifie de l'amylase salivaire parfaitement fonctionnelle de chaque souris que l'on dépose sur un gel d'électrophorèse.  [...] Après application d'un champ électrique, les molécules migrent et sont séparées en fonction de leur taille, et de leur charge. Un colorant révélant les protéines permet de mettre en évidence 3 molécules différentes. La forme L à migration lente, la forme R à migration rapide et la forme M à migration intermédiaire.  [...]

[Biochimie] Western blot en pointillés

Je lui ai fait augmenter un peu le voltage mais je n'ai jamais fait de mise au point de transfert et je ne sais pas trop sur quel paramètre jouer en priorité.  [...] Le gel moins dense peut avoir un effet soit sur la migration, soit sur le transfert, ou les deux bien sûr (qui a dit que le transfert était à exclure des causes possibles du problème ). Les interactions de la protéine avec le polyacrylamide ne sont pas à exclure non plus.  [...]