• Santé - Titre, Anticorps, Signal

[Immunologie] Test elisa

j'ai effectué un test Elisa dont le but était de déterminer le titre de deux solutions d'anticorps primaire. Je sais que le titre correspond a la dilution permettant d'obtenir 50% du signal maximum.  [...] Si on sort du contexte de l'ELISA ou tu dois diluer pour trouver le titre les raisons pour lesquelles on dilue au maximum les anticorps sont. 1)limiter le bruit de fond. Plus ta solution est concentré en Ac plus ils risquent de se fixer un peu n'importe où et donc tu auras du bruit de fond.  [...]

Virologie : titre d'un anticorps ?

le titre de l'anticorps est la dilution d'antisérum donnant 50% du signal maximal théorique (ça me parle pas bcp, je vois ce que c'est l'antisérum, j'ai la valeur de l'antigène mis dans chaque puit,...).  [...] ce serait l'inverse de la dilution qui montre la dernière un signal positif de réaction des anticorps avec l'antigène (ce qui serait alors 1000...).  [...]

Lire un test HIV

Je ne parle pas des protéines du virus. Mais en toute rigueur, lorsqu'on est séronégatif, on ne doit pas avoir créé d'anticorps contre lui. Or le test Elisa donne un index de O,32, ce qui signifie qu'il y a eu réaction des protéines contenues dans ce test avec des protéines contenus dans le sang, la réaction étant semblable à celle apparaissant chez la personne séropositive entre les protéines du test et les anticorps au vih (immunoprécipitation par exemple, avec lecture de la turbidité par détermination de la densité optique).  [...] Comme plusieurs anticorps secondaires se fixent en meme temps sur l'anticorps primaire tu as une amplification du signal, enzyme l'enzyme va degrader plusieurs molecules de substrat (re-amplification du signal).  [...]

[Biochimie] Western Blot

Par ailleurs, mes anticorps secondaires sont un peu vieillos mais néammoins congelés avec du glycérol. Mon signal final sur le film est faiblard. j'ai vérifié mon kit ECL et même employé celui d'un collègue. Mon anticorps secondaire peut-il être périmé à ce point en 2 ans Faut-il l'utiliser à l'obscurité comme ceratin le préconise bien que d'ordinaire il marchait même à la lumière.  [...] Par ailleurs, mes anticorps secondaires sont un peu vieillos mais néammoins congelés avec du glycérol. Mon signal final sur le film est faiblard. j'ai vérifié mon kit ECL et même employé celui d'un collègue. Mon anticorps secondaire peut-il être périmé à ce point en 2 ans.  [...]

Méthode Elisa

4) ajout d'anticorps secondaires qui vont reconnaitre les Ac de détection. cela a pour but d'augmenter le signal et donc d'améliorer la sensibilité du test. Ces Ac sont couplés à une enzyme.  [...] 5) détection finale des anticorps secondaires par l'ajout d'un substrat. ce substrat chromogène va être métabolisé par l'enzyme accrochée à l'Ac secondaire et donner une couleur.  [...]

[Immunologie] protocole immuno-histo-chimique

c'est la révélation. ton anticorps secondaire est couplé a une peroxydase, qui transforme le DAB en un produit coloré, donc localisé la ou Ki67 se trouve (d'ou l'intéret d'inactiver les perox. qui trainent un peu partout).  [...] Pour les peroxydases endogènes, ce sont les peroxydases qui sont présentent dans ton tissu avant que tu n'ajoutes ton anticorps couplé à la peroxydase. Ces peroxydases endogènes utiliseraient la DAB exactement comme ton système de révelation et génereraient du bruit de fond.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème immunofluo

quelqu'un aurait de l'expérience en IF voici mon problème. j'ai jusqu'à présent travaillé avec des cellules vivantes en fusion GFP. Désormais je dois faire des IF sur cellules fixées. Pas de problèmes pour un marquage de la tubuline (avec des anticorps) ou pour un marquage actine (avec de la phalloidine), mais pas moyen d'avoir un signal avec ma protéine d'intérêt.  [...] L'anticorps marche bien en WB et la personne ayant précédemment travaillé dessus avait un signal qui semblait cracher à fond. J'ai suivi son protocole à la lettre mais pas moyen Pourrais-il y avoir un problème avec l'anticorps secondaire.  [...]

Immunoblot

Et en effet l'utilisation d'un anticorps secondaire reconnaissant l'anticorps primaire est désormais utilisé la plupart du temps (pour ne pas dire tout le temps ), mais là encore j'ai voulu simplifier pour que ce soit compréhensible, en introduisant en même temps la notion de détection par anticorps couplé à une activité physique, chimique ou biochimique détectable.  [...] A noter que l'on utilise majoritairement la méthode indirecte, qui a l'avantage d'amplifier le signal car plusieurs anticorps secondaire peuvent se fixer sur le même anticorps primaire.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage de l'activité peroxydase

Pourquoi ne pas essayer de perméabilisé la cellule pour vos anticorps (couplé à un fluorochrome) qui se fixeraient sur les péroxydases Je ne sais pas si expérimentalement c'est faisable.  [...] 2. Que je plante la fixation / l'emission d'un signal correct pour tous mes autres anticorps (j'utilise un mix de 4 ou 5 anticorps, tous membranaires).  [...]

[Immunologie] Elisa

le test en sandwich. d'abord tu coat ta plaque avec un anticorp par ex, ensuite tu rajoute ton antigène, puis enfin tu rajoute un autre anticorps qui va se fixer sur un autre épitope de ton antigène. le signal corespon a la concentration de ton antigène.  [...] le test par comptition. tu as coaté ta plaque avec un anticorps, mai la tu rajoute 2 antigène qui vont etre en compétition avec ton anticorps. sur l'un de tes Ag il y en aura un de concentration connu et marqué et l'autre sera celui recherché X. plus il y a de signal moin il y a d'AgX recherché.  [...]