• Santé - Température, Amorces, Hybride

la bonne Température d'anneling, PCR microsatellites

- admettons une Tm à 54°C (pour les amorces F et R), Température où la moitié des amorces sont monocaténaires et l'autre moitié s'hybride.  [...] - pour une PCR avec Ta. Tm, les amorces lorsqu'elles se fixent (car Température où il y a + de brins qui tendent à être monocaténaires que bicaténaires), s'hybrident avec + de spécificité, en particulier avec leur site spécifique de fixation de l'ADN-. du coup, plus de spécificité mais moins de rendement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification PCR

Sinon, je ne comprend le terme PCR emboîté désolé, mais cela ne me dit rien. S'agit-il de réaliser, tout simplement une PCR avec les même amorces sur mon produit PCR Je pensait augmenter ma température de 3°C (je serait alors à 1°C du TM des primers), mais je doute que cela puisse changer quoi que ce soit.  [...] La PCR emboîtée utilise comme matrice le produit d'une première PCR et des amorces hybridant en 3' des amorces utilisées pour la première PCR. Ainsi tu augmente la spécificité de l'amplification puisque tu forces le système d'amplification a être spécifique de ton gène.  [...]

[Biochimie] Demande de definitions

Falindor avait partiellement raison en parlant de l'ARN. En effet pendant la réplication chez les eucaryotes, le brin retardé est synthétisé a partir d'amorces d'ARN. Cependant on ne parle pas à ce moment d'hybridation puisque les amorces sont synthétisées directement sur place.  [...] Oui, je ne voulais pas dire que les amorces d'ARN n'existent pas mais seulement que le terme d'hybride n'était pas dû à l'assemblage mi-ADN mi-ARN.  [...]

[Génétique] ARN ou ADN amorce

On peut utiliser un primer ARN pour une PCR, ça ne gène pas la polymérase. D'autant que thermodynamiquement, l'hybridation ARN/ADN est plus aisée que ADN/ADN. Néanmoins pour une PCR classique, on utilise quasi systématiquement une amorce ADN. L'important c'est que les nucléotides libres utilisées pour l'élongation soient des désoxy ribonucléotides.  [...] Je t'avoue que je ne m'étais jamais posé cette question. Si l'amorce est ARN, effectivement on se retrouve avec un amplicon hybride. Néanmoins, la taille de la séquence amplifiée est quand même généralement très supérieure à celle des amorces, donc on est majoritairement en présence d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagénèse dirigée

oui c'est un peu court. Mais pour ce genre de technique tu dois utiliser des amorces contenant la séquence que tu veux modifier, mais aussi une séquence commune avec ta matrice d'ADN. Comme ca l'amorce s'hybride partiellement avec ton ADN, et le reste contient ta mutation.  [...] Dans un premier temps tu dois insérer ta séquence à modifier dans un plasmide. La Pfu turbo est une polymérase qui fait moins d'erreurs que la Taq. Par PCR, tes amorces contenant les mutations désirées vont être allongées, tu obtiendras ainsi des plasmides linéarisés, pareils au plasmide parental mais contenant tes mutations.  [...]

Enzyme Taq polymérase et réaction de PCR

J'aurais une question concernant la réaction de PRC. On utilise 2 amorces une sens et une anti-sens pour délimiter la séquence spécifique à amplifier. Chacune des alors s'hybride sur un brin après dénaturation du double brin. Puis L'enzyme Taq polymérase rajoute les désoxynucléotiques complémentaires, mais comment sait-elle quand elle doit s'arrêter.  [...] mais au cycle d'après, c'est l'autre amorce qui s'hybride sur le brin néosynthétisé et la Taq va dans l'autre sens, jusqu'à l'endroit ou l'amorce du cycle précédent s'était fixée.  [...]

[Génétique] Polymerase chain reaction

Tout d'abord, lorsque l ont effectue une PCR (polymerase chain reaction) a partir d un brin d adn, on dénature le brin et on l'hybride a deux amorces. l'amorce F va dans le sens et la R dans l antisens. Mais sur un brin d adn, qu est cr qui nous permet de savoir quel est le sens et l antisens.  [...] Mais du coup si j'ai bien compris on ne parle d amorce R et F que pour un ADN monobrin ou un ARN (Dans ce cas il faut une transcription inverse).  [...]

PCR : Réaction en Chaîne par Polymérase

Il y a de multiples variantes de PCR pour détecter une mutation. Par exemple, tu prends un couple d'amorce dans lequel une des deux amorces a son extrémité 3' qui s'hybride sur un nucléotide muté ou non. Si tu choisi une amorce spécifique du nucléotide non muté, la présence d'une mutation va empêcher l'hybridation de l'extrémité 3' de l'amorce, et la polymérase ne pourra pas amplifier le fragment.  [...] Ah d'accord merci beaucoup. une autre question s'il vous plaît, donc pour le Southern Blot aussi, par exemple, où l'on aurait deux allèles à identifier il faut qu'on amplifie ces allèles pour pouvoir les voir sur la membrane de cellulose.   [...]

[Biologie Moléculaire] Peptide signal

Je souhaite cloner dans pGEMTeasy puis dans pET21 un gène qui renferme 7 exons le premier exon code pour le peptide signal, j'ai commander deux types d'amorces sens le premier s'hybride avec l'exon 1 (peptide signal) et le deuxième avec l'exon 2. j'ai commencer mes PCR avec le second type mais je ne sais pas exactement quels sont les conséquences et et ce que ça va influencer sur la conformation protéique ou l'activité biologique.  [...] Oui le peptide signal permet l'adressage de la protéine vers un compartiment cellulaire bien défini mais le fait qu'elle ne soit pas orienter vers un tel compartiment elle peut perdre dans un autre sa conformation ou son activité biologique bon c'est ce que je pense.   [...]

Synthèse du brin retardé d'ADN

-L'ADN polymérase I sert à dégrader les amorces d'ARN grâce à son activité 5'3' exonucléase et les remplacer par de l'ADN grâce à son activité polymérase.  [...] A quel moment intervient la ligase Avant on après le remplacement des amorces ARN par de l'ADN Obtient-on d'abord un brin hybride ADN/ARN pour ensuite faire intervenir l'ARN polymérase I et obtenir un brin d'ADN.  [...]