• Santé - Témoins, Enzyme, BSA

[Biologie Moléculaire] Gamme et témoin BSA

Nous utilisons une gamme étalon de BSA, jusque la aucuns problèmes. Ensuite lors de la mesure de l'activité enzymatique, plusieurs témoins sont utilisés et notamment le témoin où l'on remplace notre enzyme par de la BSA.  [...] Merci. J'ai vérifié et on utilise bien la BSA comme témoin car elle n'a pas d'activité enzymatique, cela nous permet donc de vérifier que l'activité mesurée est bien du à l'ajout de l'enzyme et non à l'ajout de protéines.  [...]

[Biochimie] Détermination d'une concentration et d'un degré de pureté

On a dosé la B-galactosidase par la méthode BCA en utilisant la BSA comme protéine standard (ou étalon). Bref après préparation des diverses solutions étalon de BSA et des deux solutions de B-galactosidase (0.1ml d'enzyme + 1.4ml d'eau pour le tube 1 et 0.  [...] 2ml d'enzyme + 1.3ml d'eau pour le tube 2) on mesure l'absorbance des solutions et on trace le graphique (f(A)= masse BSA), on trouve 0.09µg de BSA donc de B-galactosidase (problème d'absorbance pour le tube 2 du coup on ne garde que le tube 1).  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole pour une ligature + tranformation ?

Tous les buffers sont concentrés 10X. Il ne faut jamais mettre plus de 1/10 du volume final en enzyme. En général je digère dans 50µl avec 5µl de buffer et 5µl d'enzyme. Vérifie bien qu'il ne faille pas ajouter de BSA. Certaines enzymes le nécessitent. Vérifie aussi la température d'activité maximal.  [...] Certaines enzymes necessitent l'ajout de BSA dans le tampon, mais la BSA ne gène l'activité d'aucune enzyme de restrction. Donc si tu as une enzyme necessitant BSA et pas l'autre, pas de souci.  [...]

[Biochimie] Destruction des ponts disulfure

Je vais faire des tests de fixations du marqueur fluorescent à des protéines témoins (BSA & lysozyme) la semaine prochaine avec un microscope haute résolution. Je verrai ce que cela me donne avec et sans TCEP. Et je croise les doigts.  [...] @noir_ecaille. kansai-ben. Mes collègues sont entrain de bien se marrer à m'apprendre le japonais, et plus spécialement ce patois.   [...]

Problème de digestion enzymatique

4- Vos recombinants sont issus de purif sur gel d'amplification PCR Beaucoup de possibilités. vous n'avez pas sélectionné la bonne bande sur gel, ou alors vous êtes planté dans les amorces de PCR, expliquant l'absence d'un site normal de restriction.   [...] et une autre bande très fiiine de 5kb et comme d'habitude j'ai fait plusieurs essais en augmentant chaque fois la quantité d'enzyme mais rien n'a changé.  [...]

Problème lors de ligation

Je précise que j'ai vérifié qu'il n'y avais pas de conta dans la BSA ou le tampon on l'enzyme en réalisant un digestion sur un autre vecteur ou cela fonctionne.  [...] Quelle enzyme utilises tu pour déphosphoryler (la déphosphorylation n'est pas toujours complète et certaines enzymes peuvent abimer l'ADN).  [...]

[Immunologie] Test Elisa

On fixe d'abord l'antigéne BSA, puis on effectue un lavage, puis on ajoute un anti corps anti BSA, puis lavage, puis on ajoute un anticorps anti anticorps anti BSA.  [...] ça peu être ça, si tu veux doser la concentration en Ac anti BSA et que ton Ac anti Ac est marqué par une enzyme.  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Le protocole que je dois utiliser pour extraire une enzyme de la chair d'un fruit implique l'ajout de BSA dans le tampon d'extraction.  [...] une solution serait de faire une extraction témoin sans échantillon que tu utiliserais pour faire la gamme, mais je n'ai aucune idée de si la quantité qui sera présente aura un impact sur le dosage.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de construction d'une banque d'ADNc

Est-ce que vous rajoutez bien la BSA qui est nécessaire pour un clivage optimal par Sfi1 Quel contrôles intra-manip avec vous fait (contrôle de clivage par l'enzyme, de recircularisation du vecteur,...) Quelles bactéries utilisez-vous pour la transformation Avez-vous fait le contrôle de base nécessaire sur la transformation des bactéries. transformation avec un plasmide contrôle.  [...] La vérification du clivage des ADNc par une enzyme de restriction peut se faire si le clivage génère des fragments de taille différente et suffisamment longs. Ainsi par migration sur gel d'agarose, la présence des bandes d'intérêt permet de valider le clivage.  [...]

[Biochimie] La BSA

La BSA est principalement utilisée soit pour bloquer les sites aspecifiques sur les membranes lors des western-blot, et comme stabilisateur dans les réactions enzymatiques.  [...] La BSA est utilisée, comme dit Yoyo, pour le blocage des sites aspécifiques lors du Western, aussi pour faire des gammes étalon lors de certains dosages (Bradford), aussi je l'ai utilisée pour diminuer mon bruit de fond lors d'hybridation sur microarray, parfois elle peut être aussi utilisée en tant que témoin de charge (dans des gels).  [...]