• Santé - Témoin, Vecteur, Vide

[Biologie Moléculaire] Construction d'ADN

Le lendemain. RIEN. Même pas une petite colonie sur le témoin négatif du vecteur vide... J'ai également fais en sous clonant mon insert dans pGEMT mais là encore je récupère des bactéries blanches (qui sont censé avoir l'insert) mais au final après séquencage elles sont vides.  [...] Votre temoin négatif vecteur vide, quel est il exactement Vous transformez avec un vecteur vide (test de transformation) ou vous transformez avec le vecteur vide linéarisé (test de linéarisation).  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

Est ce que ton vecteur pour le témoin a été digéré si oui est ce que vous avez fait une ligation après (sans insert, juste lui tout seul).  [...] puisqu'il y aura jamais de ligation sans ligase, et dc l'ajout de l'insert n'apporte rien. Ce temoin serait equivalent a celui du vecteur seul = temoin de digestion.  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

J'ai besoin d'aide pour une question dans un exercice portant sur la construction d'un vecteur d'expression pour une proteine recombinante.  [...] Le rapport nombre de colonies dans la boite témoin/nb de colonies sur la boite insert_vecteur donne une bonne indication de la réussite de la ligation et de l'incorporation de ta construction dans le vecteur. Il y a en général quand même des colonies dans la boite controle, prinicpalement parce que il subsiste quelques exemplaires circulaires de ton vecteur.  [...]

Gène Syncytine

Je peux cloner ce gène, l'introduire dans un vecteur ( enzymes de restriction, lygase...) + mutagenèse, j'en fait un autre témoin sans mutation, je regarde les protéines produites.  [...] On le clone et on effectue des mutagenèses comme tu as dit, selon la mutation qu'on a faite, on regarde après qu'on est introduit le vecteur YAC porteur de la mutation par un liposome dans le modèle animal, ce que ça engendre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

J'ai laissé la ligation se faire O/N à 4°C. Ce matin j'ai verifié les ligations sur gel, j'obtient des smears pour toutes mes ligations y compris la ligation témoin (vecteur ouvert sans insert).  [...] J'ai testé les différentes propositions que vous m'avez faites. J'ai pu obtenir des colonies ce matin. Seulement, il y a un souci, j'ai des colonies dans ma transformation témoin (bactéries transformées avec le vecteur ligaturé sur lui même). Je vais prendre le pari ce matin et essayer de faire des PCR de colonies pour voir si les fragments d'intérêt on bien été cloné.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de ligation??

Ensuite tu clives le vecteur avec BamH1 (ou EcoR1), et tu réalises ta ligation, sans l'insert, puis tu transformes avec le vecteur vide (qui n'a subit aucune étape de modification) et en parallèle avec le vecteur religué. Là tu verras d'une part si la transformation marche (avec vecteur vide) et si la ligase marche (vecteur clivé religué).  [...] Ce que tu peux ensuite contrôler si tout ceci a fonctionné, c'est si EcoR1 clive bien le vecteur après l'action de BamH1 (ou l'inverse). clivage vecteur avec BamH1 puis ecoR1 (ou l'inverse) et ligation puis transformation. Normalement tu n'auras aucune colonie, mais je te conseille de faire un témoin clivage BamH1 + ligation + transformation, car le second clivage n'est pas forcément fiable à 100%, donc la présence de quelques colonies ne veut pas dire qu'EcoR1 derrière BamH1 est totalement inefficace.  [...]

problemes de la PCR avec les amorces T7/SP6

s'il vous plait, je rencontre un grand problème avec la PCR d'un fragment d'ADN que j'ai cloné dans un vecteur pGEM-T easy avec les amorces T7/SP6.En effet, la migration sur gel des clones que j'ai amplifié ne donne rien pour la majorité.On DIRAIT QU'IL S'AGIT D'UN témoin négatif.  [...] Même la bande du vecteur seul n'apparait pas donc le problème ne serait pas lié a un faux-positif.Quelqu'un pourrait il m'aider svp.  [...]

[Génétique] Tale nuclease

- transfection pendant 48h des talens du gene d'interet et les cellules temoin ( moi j'avais mis avec vecteur sans les talens) mais pour votre par vs avez dis avec des talens qu'on sait quil marche bien (je compprend poen quoi cava ns etre utile).  [...] - extraction de l'ADN puis PCR avec des amorces specifique du gene d'interet puis digestion avec la nuclease T7 et migration sur gene d'agarose et comparaison avec le temoin ( le produit du digestion du gene d'interet sans l'action des talens).  [...]

plasmide pcDNA3 et mock??

Le plasmide pcDNA3 est ce qu'on appelle un plasmide vide, c'est à dire qu'il contient tout les éléments d'un plasmide classique (promoteurs, gène de résistance, origine de réplication...) mais pas de gène d'intérêt. Il est utilisé comme témoin négatif lors de transfections (transfection de matériel génétique mais pas d'expression de gène) ou comme témoin positif lors de transformations bactériennes (formation de colonies grâce au gène de résistance).  [...] Pour ce qui est du mock, je pense que vous faites erreur, ce n'est pas un plasmide mais cela correspond à un témoin négatif, c'est à dire qu'on ne tranfecte/transforme rien, le plasmide est remplacé par de l'eau dans le milieu de transfection/transformation.  [...]

[Biologie végétale] Le Gravitropisme

C'est un control une référence si tu veux. Quand tu fais une expérience il faut toujours que tu compares le résultat obtenu avec le témoin ( c'est un mot très important à retenir. ).  [...] Mais comment expliquer laréaction de courbure pour la racine vu que ELLE (et pas le témoin) a des concentrations identiques.  [...]