• Santé - Témoin, Cellules, Anticorps

[Immunologie] Cytotoxicité indépendante de l'antigène

Je travaille actuellement sur un anticorps bispécifique antiCD3 x anti antigène tumoral surexprimé dans certains types de cancers. Pour cela, je fais un ratio 10.1 de PBMC (10).cellules cibles(1) et je teste si mon anticorps est capable de lyser spécifiquement les cellules tumorales (=cellules cibles) possédant l'antigène surexprimé comparativement à un témoin neg (qui sont des cellules saines).  [...] En effet nous avons bien une liaison d'un bras de l'anticorps à cette cible sur les cellules tumorales mais aucune liaison détectable par FACS dans le cas de cellules saines. Notre objectif est de cibler le CD3 pour éviter d'être dépendant du CMH, très variable selon les individus donc nous avons besoin d'un pontage entre le CD3 des lymphocytes et la cible pour que les lymphocytes T cyto toxiques puissent se rapprocher physiquement des cellules tumorales et les tuent.  [...]

[Biochimie] Détection au cytométre de Flux

Mon problème se situe au niveau des résultats obtenus. J'utilise un anticorps couplé à du PE et les cellules sont perméabilisée à la saponine car le CMH de classe I que je souhaite détécté à été rendu soluble. Je commence donc par passer mon témoin négatif (cellules perméabilisées non transfectées + Ac-PE), j'obtiens un pic normal.  [...] Enfin, les cellules ont été lavées après incubation avec l'anticorps, 3 lavages successifs au PBS BSA + centrifugation à chaque fois.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quelle stratégie adopter?

Pour se faire j'ai construis deux vecteurs, le  [...] contient un promoteur fort puis la PG1 et la GFP et le deuxième contient un promoteur fort puis la SIRT1 puis la luciférase je réalise un BRET en excitant la luciférase avec coelenterazine j'ai donc fluorescence de la GFP j'ai donc bien montré l'interaction or le professeur me demande de faire un test de localisation puis un test de fonction de la proteine endogène pour cela est ce que je dois prendre des cellules hépatiques non transfectées comme temoin pour la localisation il me semble qu'il serait judicieux de faire une immunohistochimie mais est ce que je detecte les 2 proteines dans la meme cellule et ceci avec 2 anticorps différents couplés avec une fluorescence différenteet pour la fonction je ne sais pas dutout d'autant plus qu'il faut savoir si la proteine chimerique modifie les fonctions endogènes de la proteine pour ca je netrouve pas de strategies.  [...] est ce que je dois prendre des cellules hépatiques non transfectées comme temoin pour la localisation il me semble qu'il serait judicieux de faire une immunohistochimie mais est ce que je detecte les 2 proteines dans la meme cellule et ceci avec 2 anticorps différents couplés avec une fluorescence différente.  [...]

[Biologie Moléculaire] kinase

Mais je voulais quand même demander, pour le témoin, as-t-on besoin d'ajouter un anticorps quelconque, sans ajoût d'Ac, n'est ce pas un témoin.  [...] 3) pour le controle, il faudrait mieux utiliser un autre anticorps que ceux diriger contre des phosphorylations. Si jamais ils ont un effet bloquant et que ta proteine est cible, tu pourrais avoir un effet dans le temoin... Et s'il est bloquant, meme remarque que pour l'anti P-Y.  [...]

[Biochimie] Ihc

De plus, je ne comprends pas la notion de témoin négatif. On prend des anticorps primaires de même type (isotype) que ceux utilisés dans l'expérience mais non spécifique à l'antigène considéré. Mais si ces anticorps sont isotypes, ça veut dire qu'il vont fixer le même antigène non Donc, je ne vois pas très bien la notion de témoin négatif obligatoire en IHC.  [...] Mais si ces anticorps sont isotypes, ça veut dire qu'il vont fixer le même antigène non Donc, je ne vois pas très bien la notion de témoin négatif obligatoire en IHC.  [...]

[Biologie Cellulaire] Hybridation génomique comparative

Je ne comprends pas le rapport entre les deux cellules, qu'est ce que veut dire co-hybridées, et à quoi sert l'étalement de chromosomes en métaphase ( témoin ou de controle ). Voici, en gros, ma traduction.  [...] Noyau d'un embryon (vert) + cellule témoin (rouge). Les deux cellules sont co-hybridées en // à // avec // sur un étalement témoin de chromosomes en métaphase. On compare ensuite le rapport entre le rouge et le vert.  [...]

[Identification] Immunohistochimie

Pour un témoin négatif je pense que l'omission de l'anticorps primaire suffit. On ajoute simplement le secondaire (Les anticorps ça coute cher) sinon, oui on peut ajouter un anticorps primaire diriger contre quelque chose qui n'est pas sensé être dans le tissu.  [...] Mais y'a encore quelque chose qui m'échappe, quand on fait une IHC c'est avec des anticorps dirigés contre des antigènes, dans ces cas là quand on fait par exemple une IHC anti-insuline (donc lui c'est anticorps si j'ai bien compris), dans le pancréas et qu'on a une réponse positifs, comment ça se fait que ça soit positif puisque dans la cellule on a des gènes de l'insuline et pas des anti-gènes (qui sont normalement mauvais non ).  [...]

[Biologie Cellulaire] Basophilie Eosinophilie

Il sera donc particulièrement développé dans les cellules qui synthétisent des protéines destinées à être exprimées à la surface de la cellule ou exprimées dans l'espace extracellulaire (médiateurs chimiques, composantes de la MEC pour les cellules des tissus conjonctifs).  [...] Il faut toutefois retenir que. RER, euchromatine et ribosomes libres = Basophilie, témoin d'une synthèse protéique. Mitochondrie = acidophilie, témoin d'une demande énergétique importante (cellules impliquées dans les transports actifs).  [...]

western-blot

Un culot trop gros n'est pas forcément normal. Si tu as la même quantité de cellules au départ et que tu as un problème de différences à la fin c'est.  [...] L'autre solution est d'hybrider ta membrane avec un second anticorps. qui va reconnaitre une protéine témoin (style l'actine si bien sur la taille de ta protéine témoin n'est pas la même que celle de ta protéine d'intérêt).  [...]

[Biochimie] Activité Du Complément

Votre tube 7 est un témoin positif. on provoque une hémolyse spontanée en rendant le milieu hypotonique - l'eau distillée est utilisée afin de faire éclater les cellules.  [...] Votre tube 1 est un témoin négatif. on s'assure que les cellules ne sont pas hyper-stressées et donc sujettes à hémolyse spontanée dans leur totalité. En cela on teste aussi le tampon - ou milieu isotonique - de dilution.  [...]