• Santé - Techniques, Localisation, Protéine

[Biologie Cellulaire] Techniques de localisation d'une protéine

J'aimerais savoir s'il existe des techniques pour étudier le transport d'une protéine entre le noyau et le cytoplasme, autres que les protéines de fusion GFP et l'immunolocalisation J'ai cherché des articles mais les techniques qui reviennent à chaque fois sont ces deux-là, je ne parviens pas à en trouver d'autres.  [...] On doit s'aider de nos TP/TD/cours (on y a vu les protéines de fusion-GFP et l'immunolocalisation, ainsi que la recherche in silico de NLS et NES et le fractionnement puis WB, et le modèle était des cellules BY-2) et faire un travail de recherche documentaire, mais à part ce que je viens de vous citer, je n'arrive pas à trouver d'autres approches expérimentales.  [...]

[Biochimie] Isolement des protéines du périplasme de Bactéries + Test d'activité spé d'une protéine en SDS-PAGE

Pour isoler le périplasme et prouver que cette protéine est dedans ils utilisent deux techniques qu'ils disent complémentaires.  [...] Alors je pense que c'est plutôt une histoire de vocabulaire, mais pour prouver la localisation de la protéine dont ils étudient l'adressage, les auteurs parlent toujours de tester l'activité spécifique de SodA par SDS-PAGE ou autres techniques d'électrophorèse.  [...]

[Biologie Cellulaire] Mise en évidence de protéines membranaires

Bonjour, je suis actuellement bloqué sur une démonstration de la localisation des protéines (si elles sont transmembranaires ou périphériques) il est marqué dans mon cours.  [...] Tu auras donc d'autres techniques pour les autres cellules telles que la cryofracture (pour la localisation et la mise en évidence), l'électrophorèse des protéines membranaires solubilisées (pour la taille et le nombre d'unités,...), la modélisation (fonction, structure qui peut être un indice sur la nature de la protéine (plus d'hélices alpha et de feuillets béta chez les P trans-membranaires...),  [...]

Les nanocristaux appliqués à l'étude du vivant

Ils ont ainsi confirmé que la vitesse de diffusion des récepteurs à la glycine était différente suivant leur localisation, de type brownien (agitation moléculaire aléatoire) dans la région extrasynaptique et de plus en plus ralentie à l'approche de la synapse où le récepteur est censé interagir avec son neurotransmetteur et des protéines cytoplamiques pour permettre la transmission d'un signal.  [...] Leurs données montrent que le récepteur change de localisation en permanence et que les techniques précédentes, utilisant des particules plus grosses, ralentissaient les vitesses de diffusion du récepteur.  [...]

La microscopie à 2 photons et le mouvement des proteines

La protéine est alors pistée dans les cellules. sa localisation spatio-temporelle peut être déterminée avec précision (à 10 millisecondes et à 1 micron près).  [...] En utilisant la microscopie confocale simple ou a 2 photons, on peut aussi visualiser en temps reels l'interaction de deux proteines dans une cellule au cours d'un evenement biologique (technique de FRET). Ces techniques (FRET, FRAP, FLIP...), ont revolutionne la facon de penser les processus biologiques (et tout ca, essentiellement grace a la caracterisation d'une proteine naturelle fluorescente extraite d'une meduse, la GFP).  [...]

Petite énigme à vous soumettre...

Le coût, j'en conviens, est important, car la méthode demande des concentrations de ligand importantes (ratio de 1 protéine pour 300 ligands par exemple...). mais elle est utilisée. Si la méthode RMN te rebute, et que tu préfères des techniques plus simples de caractérisation de Kd et de Ki (par des tests in vitro ), j'ai envie de dire que ces tests restent insatisfaisants, car ne reflètant pas d'informations très poussées sur l'intéraction protéine-ligand, comme une cartographie des groupements mis en jeu dans le ligand, par exemple.  [...] Si la méthode RMN te rebute, et que tu préfères des techniques plus simples de caractérisation de Kd et de Ki (par des tests in vitro ), j'ai envie de dire que ces tests restent insatisfaisants, car ne reflètant pas d'informations très poussées sur l'intéraction protéine-ligand, comme une cartographie des groupements mis en jeu dans le ligand, par exemple.  [...]

[Biochimie] Méthode d'études AA et protéines

Par exemple, les électrophorèses, l'isoélectrofocalisation sont des techniques d'isolement (on peut même combiner les deux. SDS-PAGE 2D).  [...] Pour séquencer une protéine il faut bien sûr l'isoler et la purifier avant, mais ce sont pas des techniques de séquençage proprement dites.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunoprécipitation et immunodéplétion

Je n'ai pas tout à fait compris la différence entre une immunoprécipitation et une immunodéplétion... J'ai juste compris que ces deux techniques permettent l'isolement d'une protéine d'intérêt (et son enrichissement) à partir d'un mélange de protéines d'un extrait.  [...] je ne suis pas sûre de ma réponse, mais pour moi les 2 techniques reposent sur le même principe. Mais la différence c'est que dans une immunoprécipitation, ce qu'on cherche c'est d'isoler notre protéine d'intérêt de toutes les autres présentes dans l'extrait protéique afin de l'étudier spécifiquement.  [...]

Comment rechercher une intéraction protéine/glycoprotéine ?

Je cherche des techniques pour trouver une (des) interaction entre une protéine connue et une (des) protéine ou glycoprotéine du tube pollinique (à sa surface ou sécrétée).  [...] Ton dextran peut contenir plusieurs systemes de couplage (par exemple streptavidine, Anti tag his...). Tu couples à ton dextran ta proteine avec un tag his a une extremité (par exemple) et tu fais passer par dessus un des ligands supposés.  [...]

[Biochimie] pH optimal et Stabilité d'une enzyme

Ce ne sont que des propositions, d'autres techniques peuvent être employées (ionisation douce en ESI-MS, RMN, digestion ménagée,...). Le but de ces approches étant d'observer une modification de la structure de la protéine qui en soit est témoin d'une déstabilisation de la protéine.  [...] Merci beaucoup, il ne me reste plus qu'à manipuler en espérant trouver de bons résultats. En fait, je dose les groupements reducteurs des acides galacturoniques formés par la dégradation du pectate sous l'effet de l'enzyme. Le dosage de l'activité enzymatique s'effectue au DNS (methode de Miller). Je pense que ça devrait aller.   [...]