• Santé - Technique, Western, Protéines

[Biologie Moléculaire] Technique Laurière et Western Blot

Je suis actuellement entrain de tester la technique de Laurière en Western Blot, pour transférer des protéines d'un gel de polyacrylamide sur une membrane de nitrocellulose.  [...] Vous pouvez également pousser le temps et le courant au maximum pour avoir la totalité de vos grosses protéines et faire sortir complètement vos petites protéines et rajouter une seconde membrane derrière la première pour faire un western sur les deux en parallèle.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot "semi-quantitatif", pourquoi??

J'utilise la technique du western blot afin de quantifier mes protéines d'intérêt (par chemiluminescence, révélation par l'ECL+ et analyseur d'image permettant de quantifier mes blots), mais une question se pose à moi. pourquoi dit-on du western blot que c'est une technique semi-quantitative Quelles sont les limites de la quantification.  [...] On streap la membrane et on effectue un immunomarquage de la protéine d'intérêt. Vous ne savez pas combien vous avez de protéine dans l'absolu. Mais le rapport prot d'intérêt/actine dans chacune des puits vous permet de dire qu'il y en a plus là que là. C'est relative ou encore semi quantitatif.  [...]

La propolis des abeilles contre le cancer de la prostate

Le CAPE ne détruit donc pas le cancer de la prostate, il le ralentit. Un constat intéressant, mais le fonctionnement reste à élucider. Grâce à une technique novatrice, baptisée micro-Western array, on commence à mieux cerner ses mécanismes d'action. Il s'agit de scanner des centaines de protéines différentes avec des anticorps, à travers un large spectre de voies de signalisation associées à différents événements.  [...] Les scientifiques ont remarqué que la protéine 70S6 kinase et la voie de signalisation Akt étaient inhibées. Or, toutes deux jouent un rôle fondamental auprès des cellules tumorales, leur indiquant en temps normal la présence de ressources pour croître et se multiplier.  [...]

Sida : le dépistage du VIH | Dossier

La méthode de dépistage la plus célèbre reste le test Elisa, pour enzyme-linked immunosorbent assay. C'est la technique recommandée en France pour déterminer le statut sérologique d'un individu, combinée à la détection de l' antigène p24. La méthode est décrite plus en détail dans une autre page du dossier.  [...] Le western blot est une technique très utilisée en biologie. Elle consiste à séparer les protéines d'un échantillon en fonction de leur taille par électrophorèse. Dans le cas du VIH, cette méthode est utilisée et recommandée pour confirmer un test Elisa positif, mais aussi pour déterminer si l'infection est due au VIH-1 ou au VIH-2, sachant que les traitements sont un peu différents.  [...]

[Biologie Cellulaire] Validation analyse transcriptomique

à la suite d'une analyse transcriptomique, pourquoi est-il nécessaire de la valider, par exemple en effectuant une cytométrie à flux.   [...] Une analyse transcriptomique ne renseigne que sur l'expression transcriptionnelle du génome. Les fonctions sont établies par les protéines (or cas des miRNA bien sûr), par conséquent si on veut faire un lien entre un transcriptome et une fonction ou un phénotype, il est mieux de faire une analyse plus poussée avec de la cytométrie de flux, du western blot, ou tout autre technique permettant de finaliser la réponse à la question initiale.  [...]

différence entre western blot et immunoblot

Un western blot est un cas particulier d'immunoblot. Un immunoblot est une technique avec laquelle tu détectes des molécules immobilisées sur une membrane avec des anticorps. Un western blot est un immunoblot dans lequel tu détectes des protéines séparées par électrophorèse.  [...] ok je vois c'est quoi l'intéret alors de séparer les proteines (westernblot) si on peut les précipiter en solution (immunoblot).  [...]

[Biochimie] dot plot et overlay

J'ai cherché un protocole pour faire cette technique cependant je n'ai pas trouvé un protocole complet qui comporte le dot plot et l'overlay surtout que ceux qui font l'overlay commence par faire un western blot alors que moi j'évite de le faire pour ne pas dénaturer mes protéines.  [...] Ce n'est pas une technique très courante a ma connaissance, et à mon avis la façon de procéder dépend énormément de la nature des deux protéines dont on veut étudier l'interaction.  [...]

[Biochimie] Problème avec mon western

Ou alors essaye la technique proposée par Gorben, mettre tes deux anticorps primaires dans la même solution de TBS-T lait. Mais toutefois, je te conseille de faire attention les premières fois, il faut que tu t'assures que cela ne modifie pas, pour x raisons, le profil de ton western.  [...] la technique proposée par Gorben est bonne, sauf si tu fais ton western pour la premiere fois et que tu ne sais pas comment tes AC I réagissent. Car si jamais ils donnent des bandes aspécifiques et que manque de bol tu en as aux alentour du poid moléculaire d'une de tes protéines tu risques d'interpréter un artéfacte, il faut donc etre tres vigilant.  [...]

[Immunologie] immunoprécipitation

L'immunoprécipitation est une technique biochimique permettant de mettre en évidence une intéraction physique entre 2 protéines. On effectue d'abord une IP avec une résine permettant de purifier uniquement une protéine et ensuite on révèle par western la seconde protéine qui, si elle est présente, démontre bien que les 2 protéines étaient liées car l'IP ne sélectionne que la première protéine ou la première protéine plus celles qui sont liées à elles de manière covalente.  [...] Dans la co immuno, tu va piocher avec un 1er anticorps ta 1ere protéine que tu soupçonne d'interagir avec une 2eme protéine. Ensuite a partir de ce complexe Anticorps/protéine que tu as purifié tu va essayer de detecter la 2eme protéine par un Western blot.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Je cherche le moyen d'optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire. Je travaille sur FAS (274kDa) et je n'arrive pas à la transférer.  [...] Certaines protéines notamment les plus grosses et les membranaires restaient alors piégées, elles restaient donc tout en haut du gel (dans le gel de concentration) et le WB était donc systématiquement négatif. Si tu es dans cette situation,tes échantillons doivent être fortement turbides et par ailleurs ils doivent extrêmement visqueux voire carrément pateux et le chargement doit être particulièrement difficile.  [...]