• Santé - Technique, TAP, Tag

[Biotechnologie] Global Analysis of Protein Activities using proteome chips

Son avantage majeur reste qu'il devient possible de tester rapidement et pour peu cher les interactions d'une protéine sur un quasi-protéome, même s'il faut confirmer les résultats après avec une autre technique, cela permet de réduire grandement le temps de recherche (et le nombre d'étudiant faisant du double hybride ).  [...] car en matière de protéomique, on parle souvent de spectroscopie de masse, électrophorèse, double hybrides, La technique TAP-TAG,...).  [...]

Levures et TAP tag à grande échelle

Dans mon cours en revanche, c'est écrit que le but du TAP-tag à grande échelle est d'assigner des fonctions aux protéines et de voir leurs interactions... En fait, je comprends parfaitement la technique du TAP tag (purification ou même élimination d'une protéine cible avec billes d'IgG et de calmoduline) mais en revanche, je vois mal comment identifier des protéines et leurs interactions avec cette technique.  [...] En fait, je comprends parfaitement la technique du TAP tag (purification ou même élimination d'une protéine cible avec billes d'IgG et de calmoduline) mais en revanche, je vois mal comment identifier des protéines et leurs interactions avec cette technique.  [...]

[Biotechnologie] purification d'une protéine

Là est le problème...Je ne comprend pas par quelle téchnique on peut purifier cette protéine dont on connait uniquement la séquence... peut-on purifier la protéine grâce aux résultats obtenues dans les différentes expériences.  [...] ça pourrait être du à l'utilisation d'une technique de TAP-tag. Tu fusionnes ton ORF à une étiquette tripartite. 2 motifs permettant la purification (6His et prot A par exemple) séparés par un site de coupure par une protéase (TEV en général).  [...]

Articles importants dans Nature, Science ou Cell

Un article ou ils ont fait un travaille de fou. Ils ont purifié par la technique du TAP-TAG plus de 2000 complexes issus de la levure, puis les ont analysé par spectro de masse.  [...] A mon tour. Voilà un truc de microbiologiste particulièrement classe, la découverte de la transtraduction (mécanisme par lequel les bactéries taggent leurs protéines non fonctionnelles cotraductionnellement avec un ARN unique, appelé ARNtm ou ARn-SsrA, jouant le role de messager et de transfert) chez E.   [...]

Purification protéine taggée avec HIS6

Oui en fait je pensais aussi a la technique du TAP tag pour la purifier, mais la tu as deux etapes sur colone donc forcément des rendements plus faibles.  [...] Les IP marchent bien mais tu as besoin de cross-linker ton anticorps sous peine de masquer ou fortement contaminer ton signal. Et pour la quantite de materiel, ca depend de la technique de mass spec que tu utilises. MALDI plus sensible mais gere mal les melanges d'ou le passage en gel 2D conseiller, ou electrospray (ESI) ou la la quantite de materiel requise pour l'analyse est plus importante mais les melanges sont analysables et du coup la 2D n'est pas necessaire.  [...]

[Biochimie] Etude des partenaires protéiques : Co-Immunoprécipitation, Tap-Tag et double hybride

co-immunoprécipitation. technique in vivo donc c'est bien, il y a le problème des anticorps qui peuvent en effet prendre un site de fixation d'un partenaire de la protéine.  [...] double hybride. c'est bien parce que on peut tester plein de choses et ça peut donner des pistes si on n'a pas d'idée de partenaire à priori, mais c'est du in vitro, c'est chiant et long à mettre en place, et comme toutes les techniques haut débit il y a toujours des faux positifs.  [...]

[Biologie Moléculaire] différence(s) TAP-tag / IP ?

jai une petite question, jaimerais savoir quelle est, en gros, la différence entre le système TAP-tag et la co-immunoprécipitation pour le TAP-tag on peut purifier des complexes protéiques et donc detecter des interactions protéiques mais ne peut on pas le faire aussi avec de la Co-IP.  [...] La méthode TAP est quand meme beaucoup plus propre qu'une coIP puisqu'elle repose sur deux étapes d'immunoprécipitations permettant ainsi de minimiser le bruit de fond. Tout l'intérêt du TAP tag est la.  [...]

Les récepteurs couplés aux protéines G | Dossier

La plupart des membres de la famille des RCPG peuvent former des homo- et des hétérodimères avec des conséquences fonctionnelles importantes pour leur pharmacologie, leur signalisation et leur régulation. Les MTR n'y font pas exception. L'équipe utilise la technique de BRET ( Bioluminescence Resonance Energy Transfert) et des méthodes biochimiques pour étudier l'oligomérisation et sa relation avec l'état d'activation des récepteurs.  [...] Approche à partir du récepteur entier (TAP). La technique de purification par TAP repose sur la fusion du récepteur entier avec une étiquette portant deux modules d'affinité séparés par un site de clivage par une protéase spécifique. Cette méthode permet d'effectuer une purification de complexes protéiques en condition native.  [...]

PCR sur colonie après insertion chromosomique... ?

Mais on nous demande ensuite de réaliser une PCR sur colonie pour analyser les transformants. Le primer direct s'hybridera sur la séquence codante de la protéine (côté génome bactérien), tandis que le primer reverse s'hybridera sur la séquence TAP (fragment inséré).  [...] Cependant, ce que je ne comprends pas, c'est que j'ai à la base étalé après électroporation mes bactéries sur un milieu contenant la kanamycine. Théoriquement, les bactéries qui y poussent devraient donc avoir intégré par recombinaison homologue TAP + Kan dans leur génome non.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quel est le rôle du protéasome ?

-déstabilisation d'ARN. les sous-unites alpha du proteasome portent une activite endonucleasique qui reconnait les sequences ARE (Adenosine and uridin rich elements) de certains ARN a vie courte (TNF-alpha, c-fos...).   [...] Pour la production d'antigene, le proteasome est toujours dans le coin, pas tres loin du RE et des proteines TAP qui servent justement a amener les peptides antigeniques vers les molecules du CMH-1. Mais j'avoue que je ne me rappelle pas si il y a une association directe entre le proteasome et le complexe TAP.  [...]