• Santé - Technique, Séquence, ADN

[Biologie Moléculaire] Réalisation d'un Southern Blot

Encore une question. hors mis un northern blot et western, quelle autre technique pourrait être utilisée pour détecter une séquence génique dans de l'ADN.  [...] Sinon la PCR me parrait une bonne technique pour la mise en evidence d'une sequence sur l'adn (probleme, il faut connaitre la sequence. mais bon il faut aussi connaitre la sequence pour le southern).  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagénèse dirigée

oui c'est un peu court. Mais pour ce genre de technique tu dois utiliser des amorces contenant la séquence que tu veux modifier, mais aussi une séquence commune avec ta matrice d'ADN. Comme ca l'amorce s'hybride partiellement avec ton ADN, et le reste contient ta mutation.  [...] Dans un premier temps tu dois insérer ta séquence à modifier dans un plasmide. La Pfu turbo est une polymérase qui fait moins d'erreurs que la Taq. Par PCR, tes amorces contenant les mutations désirées vont être allongées, tu obtiendras ainsi des plasmides linéarisés, pareils au plasmide parental mais contenant tes mutations.  [...]

[Génétique] détermination de codon d'initiation d'une séquence d'adn

[Génétique] détermination de codon d'initiation d'une séquence d'adn.  [...] supposant que j'ai une séquence d'adn par exemple..........a cc ttg tta act atc gcc gca tga une séquence tronquée dont je dois déterminer le codon d'initiation afin que je puisse l'exprimer quelle est la technique que je dois utiliser pour trouver la partie manquante inconnue en amont de la séquence.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage/ synthèse ARN/ ADN

Je souhaiterais cloner (bien évidemment pas réellement) une séquence d'ADN d'une bactérie.  [...] une autre à laquelle j'ai pensé, la technique PCR qui permet l'amplification d'une séquence d'ADN.  [...]

[Génétique] principe des études moléculaires

Pour l'analyse d'une mutation portant sur une région de l'ADN inconnue, on peut prendre une amorce hybridant sur une séquence connue adjacente à cette région. On peut alors utiliser la technique de marche sur le chromosome. on réalise un séquençage qui permet de connaitre une partie de la région inconnue.  [...] Grâce à ce séquençage on peut prendre une nouvelle amorce qui se situe en 3' du séquençage précédent, et refaire un séquençage, et ainsi de suite. On peut ainsi recouvrir toute la région inconnue et donc connaitre sa séquence. Pas de PCR pour cette technique, juste de l'ADN génomique en quantité suffisante pour que ce soit détectable par le séquenceur.  [...]

[Biologie Moléculaire] the Genome walking method

la marche sur le chromosome est une technique permettant le séquençage des régions amont et aval d'une séquence connue d'ADN.  [...] La première étapes consiste a construire une banque de fragment tagé (restriction et ligation du tag). Et après y a une PCR et une nested a faire, avec une amorce spécifique de ta séquence connu et une amorce spécifique du tag.  [...]

Définition | Hybridation moléculaire | Futura Santé

Technique permettant de mettre en évidence au sein d'une cellule ou d'un tissu, une séquence d' acide nucléique, par exemple de localiser un locus sur un chromosome. Elle est basée sur le principe de complémentarité des bases nucléiques, plus particulièrement entre l' ADN et le brin d' ARN de séquence complémentaire.  [...] Le brin de séquence complémentaire est aussi appelé sonde et généralement marquer pour le localiser. Il existe donc des sondes radioactives et des sondes froides.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN antisens à partir d'un fragment de gène

1) on séquence le fragment ADN du gène via Sanger (le fragment ne doit pas être trop grand pour dire d'invalider l'utilisation de cette technique).  [...] 2) on a ainsi une séquence ADN en clair. On va faire dans une chambre de synthèse un oligonucléotide d'ARN nucléotide par nucléotide qui sera complémentaire à cette séquence, donc un brin anti sens (complémentaire à l'ARN sens qui lui est strictement identique à la séquence d'ADN, avec U au lieu de T évidemment).  [...]

[Biologie Moléculaire] Sequencage supplémentaire de quelques centaines de bases

Connaitriez-vous une technique permettant de séquencer quelques centaines de bases en amont de ma séquence déjà connue sans utiliser des primers dégénérées (j'ai pensé a de la marche sur l'ADN (type seegene DNA walking kit) mais ca ne rentre pas dans mon budget. ).  [...] Nan mais si tu as séquensé dans un sens tu connais maintenant la séquence donc tu peux faire synthétiser une amorce qui te permettra de séquencer dans l'autre sens et donc en amont de tes premières amorces dégénérées.  [...]

Dépister un cancer grâce à une prise de sang ?

Pour leur étude, les auteurs ont analysé des échantillons sanguins provenant de 30 femmes atteintes d'un cancer du sein à un stade avancé. Pour dépister l' ADN tumoral, ils ont examiné la séquence de deux gènes, Tp53 et Pik3ca, afin d'y trouver des mutations caractéristiques.  [...] Néanmoins, comme le souligne Klaus Pantel, chercheur au centre médical Hamburg-Eppendorf en Allemagne, cette technique a ses failles. l'ADN tumoral provenant de différentes cellules cancéreuses ne contient pas toujours des mutations dans les mêmes gènes. Ainsi, il serait donc parfois nécessaire d'analyser la séquence de plusieurs gènes avant d'émettre un diagnostic.  [...]