• Santé - Technique, Quantité, ADN

[Biologie Moléculaire] Principe de la technique d'estimation des quantité d'ADN

[Biologie Moléculaire] Principe de la technique d'estimation des quantité d'ADN.  [...] bon soir tous. je suis un étudient en génie biologie et j'ai tombé devant une technique sert à la quantification d'ADN. c'est l' estimation des quantités de DNA par lecture au spectrophotomètre à 260 nm. si quelqu'un peut m'aider à trouver l'astuce de principe de cette technique et merci.  [...]

pcr quantitative et standard interne

J'ai compris le principe de la pcr (amplifier un fragment d'ADN ou d'ARN). Mais qu'est ce que la PCR quantitative c'est la taille du fragment amplifié que l'on veut connaitre, c'est ca et quel rapport avec la notion de standard interne (j'ai noté dans mon cours que le standard interne est un gène présent dans ttes les cellules et qu'il a pour but de corriger les erreurs O_O).  [...] Une PCR quantitative permet d'amplifier l'ADN et d'en déterminer la quantité. En utilisant un fluorochrome pour l'ADN amplifié, par exemple, on quantifie ainsi le nombre de réplicons. Le problème avec ce genre de technique c'est qu'il faut une base, un standard pour savoir ce que représente la quantité.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme de clonage avec pT7Blue

Je viens de finir un TP de biologie moleculaire basic de L2 (en anglais) dont le but est d'experimenter les techniques de clonage, de selection bleue/blanc, d'analyse sur gel d'agarose par electrophorese...ect.  [...] De plus le prof nous demande de décrire une autre méthode de clonage par PCR utilisant TOPO ou topoisomerase system. J'ai beau chercher, je ne trouve pas 'explication pour cette technique, il s'agit d'utiliser un vecteur TOPO C'est une technique utilissée pour une petite quantité D'ADN simple brin Quelle est la difference avec la technique de PCR utilisée précédement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dilution d'ADN "contaminante"?

J'ai quantifié des ADN au spectrophotomètre mais, étant un peu visqueux (trop concentrés) la mesure a été un peu faussée. Je décide donc de diluer mes ADN au 1/10 avec de l'eau milliQ (ultrapure).  [...] P.S. Au fait, je suis plutôt curieuse de savoir quelle technique tu utilises pour obtenir une telle quantité d'ADN que ta solution en soit visqueuse.  [...]

[Génétique] Polymerase chain reaction

Aussi, j ai appris que la PCR en temps reel permet de quantifier precisement un fragment d adn d'interet present initiallement dans un echantillon, je ne comprend pas comment (Je comprends que cette technique permet de voir le nombre d'adn en temps reel mais comment obtenir la quantite initiale).  [...] Pour la qPCR, lorsqu'on est en phase d'amplification, c'est à dire avant de saturer le système, la quantité d'ADN néosynthétisée par la réaction est proportionnelle à la quantité initiale (plus il y en a au début, plus on en amplifie, plus on le détecte tôt).  [...]

[Immunologie] Diagnostic_PCR

À partir d'un échantillon complexe et peu abondant (par exemple une goutte de sang), cette technique permet d'obtenir rapidement une quantité importante et exploitable d'un segment précis d'ADN (par exemple un segment d'ADN modifié dans une maladie...).  [...] Cette technique est également utilisé pour amplifier un segment précis d'ADN d'une bactérie(ou parasite,…) pour étudié le degré de virulence par exemple.  [...]

Mélanome de l'oeil : le détecter plus tôt grâce à l'ADN tumoral du sang

Un travail codirigé par Olivier Lantz et Marc-Henri Stern s'est attelé à mettre au point une technique utilisable en clinique pour détecter l'ADN tumoral dans le sang sachant que celui-ci est en très faible quantité par rapport à l'ADN normal issu des autres cellules.  [...] Les chercheurs ont ensuite eu recours à la méthode appelée polymérisation activée par pyrophosphorolyse ( PAP ), basée sur la réaction en chaîne par polymérase ( PCR ), pour détecter la présence de trois mutations ponctuelles dans ces deux gènes. Cette technique allie sensibilité et spécificité puisqu'elle permet d'identifier une mutation ponctuelle dans un gène au milieu d'une quantité d'ADN équivalente à plus de 10.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN

c'est laaaargement suffisant pour descendre les cellules, s'il y en a. Vous devriez faire un comptage pour voir combien vous avez de cellules (ou une mesure de la quantité d'ADN avec une technique très sensible). A mon avis le problème ne vient pas du protocole mais de la pauvreté en matériel.  [...] Avant j'extrayais l'ARN sur tisssus et pour lyser, j'utilisais le phénol -choroforme, quand je suis repassé sur cellules, j'ai testé le phénol-choroforme/kit RNeasy vs kit RNeasy, j'avais + en quantité et l'arn de meilleure qualité, du coup je suis resté avec ce protocole.  [...]

[Génétique] principe des études moléculaires

Je vais essayer d'amorcer le problème, quelqu'un pourra toujours me compléter ensuite. En effet pour connaitre avec précision une mutation, on peut réaliser une PCR avec des amorces encadrant la région considérée, puis faire un séquençage. Toutefois, le séquençage n'est pas absolument nécessaire et beaucoup d'autres techniques permettent de détecter une mutation en s'en passant.  [...] Grâce à ce séquençage on peut prendre une nouvelle amorce qui se situe en 3' du séquençage précédent, et refaire un séquençage, et ainsi de suite. On peut ainsi recouvrir toute la région inconnue et donc connaitre sa séquence. Pas de PCR pour cette technique, juste de l'ADN génomique en quantité suffisante pour que ce soit détectable par le séquenceur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Southern blot !!!

On veut donc que ce soit l'ADN de sperme de saumon, et non notre sonde, qui se fixe non spécifiquement à notre membrane, d'où cet ajout en quantité saturante.  [...] je ne crois pas que l'adn de saumon soit en quantité saturante. Il ne faut pas oublier que ton fragment d'intérêt a migré sur un gel, et est donc concentré sur une petite surface, ce qui n'est pas le cas de l'adn de sperme. Je seche un peu quand même parce que c'est plus vraiment une technique d'actualité.  [...]