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[Biochimie] Electophoerese des proteines

Voila j'ai un exposer a faire sur l'électrophorèse des protéines, j'ai chercher dans des ouvrages et j'ai trouve pas mal d'informations la dessus, seulement j'aimerais bien que vous m'éclairez sur les technique utiliser pour les protéine uniquement ( agarose, PAGE, acétate de cellulose.  [...] ... ), celle qui sont les plus utiliser et les différence entre eux.   [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

Voilà je voudrais savoir quel est le voltage adéquat pour séparer de protéines de 280 et 290 kDa, sachant que jusqu'à maintenant je n'ai pas pu le faire en utilisant des gel de 4-12% et 3-8% à 200V. Je sais qu'avec un SDS-PAGE la charge des protéines n'a pas de roles sur mobilité mais le voltage peut-il jouer un rôle sur la résolution de la séparation.  [...] Je profite de ce topic autour du page-sds pour vous demander un éclairage de ma lanterne s'il vous plaît. Nous avons évoqué cette technique de séparation des protéines selon leur masse dans le cadre de mon master 2, mais les protéines étant de composition en acides aminés différente, avec ce que ces derniers peuvent avoir de fonctions acides ou basiques différentes, je n'arrive pas à comprendre comme la charge globale d'une protéine dénaturée au page sds peut être la même entre deux protéines différentes.  [...]

[Biochimie] technique PAGE non dénaturante

Bonsoir tout le monde, j'aimerais bien connaitre le principe de la technique de séparation des proteines PAGE en condition non dénaturante et quel est la différence entre PAGE et SDS page et utilités.  [...] PAGE en conditions dénaturantes. les protéines sont traitées de façon à les délier et à séparer d'éventuelles sous-unités. On détruit donc leur structure tridimensionnelle. La forme de la protéine n'intervenant plus dans la migration, celle-ci se fait uniquement sur la base de la masse de la molécule. L'interprétation est généralement plus simple.  [...]

protéomique

La technique permet la séparation des protéines et l'obtention de profils très semblable aux profils de gel 2D classique, sauf qu'ici à la place des bandelettes de l'IEF, on utilise un gel 1D (SDS PAGE par exemple), on coupe la bande qui nous intéresse, puis on la fait migré sur un autre gel toujours en 1D.  [...] Il y a plusieurs possibilités. Par exemple on peut déposer des protéines issues de complexes obtenus par EMSA (=gel retard, gel shift). Cela permet de caractériser une interaction protéine-ADN.  [...]

séparations de protéines

J'aurais voulu savoir qu'elle est la meilleur technique de séparations de protéines, sachant que je me trouve en présence d'un échantillon où les protéines ont un poids moléculaire assez proche.  [...] Si tu veux ensuite étudier ces protéines notamment sur le plan fonctionnel, tu as besoin d'une méthode non destructive ce qui élimine le SDS-page. A ma connaissance, il n'existe aucune technique non destructive capable de séparer des protéines de poids aussi proches.  [...]

Recepteur à l'insuline en SDS PAGE

Je me suis peut être trompé en prenant mon cours mais j'ai mis que une des étapes du SDS PAGE, était la réduction des ponts S-S par du mercapto ethanol. Ou alors la technique du SDS c'est juste de faire migrer les protéines selon leurs poids moléculaire.  [...] Bon en fait le SDS c'est un détergent anionique fort qui va dénaturer tes protéines et les charger négativement (ce qui explique pourquoi elles migrent toutes dans le même sens ) mais le SDS ne clive pas les ponts dissulfures... A l'inverse, le bêta mercaptoéthanol clive les ponts dissulfures c'est pour ça que lors d'une dénaturation en général on balance du SDS, du bêta mercapto et on chauffe à 100°C pendant quelques minutes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gel: agarose ou polyacrylamide?

Les gels de polyacrylamide peuvent être de deux types. SDS-PAGE ou Tris-Tricine. Les gels SDS PAGE sont utilisés pour faire migrer des protéines, les gels Tris Tricine permettent de visualiser des protéines de petite taille dont le nombre d'acide aminé est inférieur à 150. les peptides.  [...] Je pense que le gel de polyacrilamide (PAGE) peut s'appliquer a separer de l'ADN mais seulement si celui ci est tres petit. En effet, il ne faut jamais oublier que l'ADN est une tres tres tres grosse molecule or le maillage du gel PAGE est lui assez petit et donc l'ADN a enormement de mal a etre separe a l'inverse des proteines ( souvent plus petites ).  [...]

[Biochimie] Isolement des protéines du périplasme de Bactéries + Test d'activité spé d'une protéine en SDS-PAGE

Pour isoler le périplasme et prouver que cette protéine est dedans ils utilisent deux techniques qu'ils disent complémentaires.  [...] Alors je pense que c'est plutôt une histoire de vocabulaire, mais pour prouver la localisation de la protéine dont ils étudient l'adressage, les auteurs parlent toujours de tester l'activité spécifique de SodA par SDS-PAGE ou autres techniques d'électrophorèse.  [...]

Déterminer état de dimérisation d'une protéine

Dans les techniques courants d'analyse biochimique (je termine un master en chimie, donc mes connaissances dans ce domaine sont limitées) je ne vois pas ce qui pourrait donner cette info... Une SDS dénaturant la protéine ne peut donner cette info. Une masse spectre donne des ions moléculaires, mais dans le cas de protéine les liaisons inter-protéine sont conservées J'ai des doutes.  [...] Sinon tu parles d'un gel en conditions non dénaturantes, perso je n'ai jamais fait que de la SDS-Page... Tu connais une technique sur gel qui permet de garder la protéine intacte (Là tu m'interesses beaucoup ).  [...]

[Biochimie] Problème de migration de gel

Et enfin je ne suis pas sûr que vous ayez déposé les mêmes quantité de protéines partout. l'intensité entre 1/3 et 4/6 n'est pas la même.  [...] Merci du conseil. Je fais des gels 15%, 7,5 cm également, et le western blot en SDS-PAGE est une technique que j'utilise tous les jours. je n'ai jamais eu de problèmes, mes collègues non plus.  [...]